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电泳缓冲液TAE与TBE大比拼

2020/09/23 13:30
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我们在进行DNA电泳时都会加入缓冲溶液,常用的缓冲溶液有TAE,含有三羟基氨基甲烷 Tris,乙酸acetate和EDTA 以及TBE( Tris-硼酸borate-EDTA )。

缓冲液的作用是什么?缓冲液的作用之一是维持溶液的pH稳定。 电流通过水时,在阳极发生氧化反应,生成氧气以及氢离子;在阴极发生还原反应,生成氢气以及氢氧根离子。长时间电泳将会使阳极变酸,阴极变碱。一个好的缓冲系统应该有较强的缓冲能力,使溶液两极的pH保持基本稳定。电泳缓冲液的另一个作用是使溶液带有一定的导电性,以利于DNA分子的迁移。 DNA为碱性物质,在电泳(缓冲液pH=8)时带负电荷,由负极向正极迁移。

电泳缓冲液还有一个组分是EDTA,目的是螯合Mg2+等离子,防止电泳时激活DNA酶。由于核酸酶需要这些离子,EDTA可以将这些离子牢牢抓住,避免核酸降解。但要注意的是,镁离子同时是很多酵素的辅助因子,如限制酶,DNA聚合酶等等,因此EDTA的浓度一般不会太高(通常在1mM左右)。

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那么TAE or TBE哪个更好呢?其实DNA电泳时应该用哪个?这其实取决于你的实验目的。下面我们来看看二者的区别。

1.TBE的电导率大于TAE的电导率。因此相比于TAE,TBE不太会导致电泳槽内过热的情况发生,长时间电泳推荐使用TBE。

2.硼酸是酶的抑制剂,因此如果你需要分离电泳的DNA用于酶切反应,建议使用TAE作为电泳缓冲溶液

3.TBE对于较小片段的分离效果更好。对于小于300bp的片段,在2%的琼脂糖凝胶上,TBE中的迁移速度更快。

4.TAE适用于大片段的分离,大于2kb的片段在TAE中的迁移速度更快(0.8%的琼脂糖凝胶中),速度比在TBE中快出约10%,TAE更适用于回收DNA片段。相比于TBE,TAE对于超螺旋的DNA分辨率更高。

综上所述,TBE与TAE哪个更好这个问题并不能一概而论,应该根据具体的实验目的来选择最合适的缓冲体系,德晟生产研发的生物缓冲剂TRIS缓冲范围广,只用这一种缓冲体系即可配制大范围pH值的缓冲液,可提供各种规格包装.购买缓冲剂尽在德晟生化,欢迎前来咨询购买。

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