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吖啶酯化学发光可研究分析环境污染物DNA的损伤

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吖啶酯化学发光可研究分析环境污染物DNA的损伤

2020/09/29 13:30
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分子生物学和基因工程的迅速发展为人类基因的研究提供了大量的信息,为遗传疾病的检验诊断和致病机理的研究带来了革命性的变革.建立简单快速灵敏的检测DNA杂交和遗传毒性效应的方法是一项十分有意义的研究课题.遗传毒性物质对DNA损伤检测,常用的方法是通过指示剂与DNA杂交前后相互作用不同而产生不同信号来检测的,现在应用较多的指示剂是吖啶酯

DNA损伤检测的方法有凝胶电泳法、紫外分光光度法、荧光法和电化学法、化学发光分析法。化学发光分析法(CL)因其灵敏度高、线性范围宽、操作方便、分析快速、易于实现自动化等优点,已在环境和生命科学等领域得到广泛应用.甲醛和乙醛均为环境污染物,在一定程度上可造成DNA的损伤.已报道甲醛、乙醛对DNA损伤的检测方法有紫外分光光度法,荧光法,毛细管电泳荧光法等.这些方法有的灵敏度较低,有的操作繁琐.本文基于甲醛和乙醛对DNA损伤前后嵌入DNA中吖啶酯量的变化,引起吖啶酯化学发光强度的变化,研究甲醛和乙醛对DNA的损伤行为,建立一种简单的评价甲醛和乙醛对DNA损伤程度的化学发光分析方法.

化学发光检测原理

化学发光实验方法

化学发光分析法检测甲醛和乙醛对DNA损伤的原理如上图所示.首先将所用玻璃发光池在一定在一定量的浓硝酸中浸泡数小时,进行酸化处理,二次水冲.在酸化处理的发光池中加入20μL1mg/mL小牛胸腺DNA,放置1h,使DNA吸附在发光池底部,然后再用二次水洗去未吸附上的小牛胸腺DNA,得到吸附有DNA的发光池.

在此发光池中加入50μL9.6×10-7g/mL吖啶酯,嵌合反应1h,使AE嵌入DNA双链结构中,用二次水洗去未嵌合的AE.最后在发光池中按顺序依次加入发光启动试剂,检测嵌合在DNA中的AE产生的化学发光.检测甲醛和乙醛损伤小牛胸腺DNA时,在AE嵌合后的DNA中加入损伤试剂,一定时间后用二次水洗去DNA受损后释放出的AE,加入发光启动试剂检测嵌合在DNA中的AE产生的化学发光强度.

本文研究表明,低浓度的甲醛引起DNA的断裂损伤,高浓度的甲醛引起DNA链的交联,乙醛仅引起DNA链的断裂损伤.吖啶酯可作为嵌入DNA双螺旋结构良好的化学发光试剂.所建立的甲醛和乙醛对DNA断裂损伤化学发光检测方法是可行的,具有简单、灵敏等优点,为环境污染物对DNA的损伤研究提供了一种简单的研究方法.

 

 

 

 

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