化学发光系列之吖啶酯要“出柜”

化学发光分析法是分子发光光谱分析法中的一类,是指物质在进行化学反应时,由于吸收了反应时产生的化学能,而使反应产物分子激发至激发态,受激分子由激发态回到基态时,自身发出一定波长的光，故化学发光检测不需要其它光源,其背景噪音较小,检测灵敏度高,在对复杂体系如生物样品中低浓度的被测对象的分析中有极大的优势。

近年来多类化学发光物质被用于临床检验领域，随着对化学发光反应机理以及对化学发光试剂性能的影响因素的认识的深入,国内外研究者们设计并合成出了多种新的高光量子产率的化学发光试剂,它们的检测灵敏度不断提高,应用范围日益广泛。

化学发光是免疫诊断的一种，是利用抗原抗体之间的特异性反应来测定体内疾病标志物浓度，从而判断人体身体状态的诊断方法，广泛应用于传染病、心脏疾病、肿瘤、妊娠检测等。化学发光由于其在安全性、自动化操作、测试准确性、以及测试速度等方面的系统性优势，在性能上对其他技术形成全面超越，因此成为免疫诊断的主流。

1983年Weeks首次合成了用于化学发光免疫分析的吖啶酯AE-NHS，该吖啶酯可用于标记抗原,抗体,特殊蛋白,DNA等生物大分子,从而实现生物分子的化学发光分析。它以光量子产率高,背景低,与蛋白,抗原,抗体等偶合后,发光效率几乎不受影响,而成为优良的化学发光免疫分析标记试剂。广大研究工作者们在此基础上继而研究出多款,发光效率更高,热稳定性更好,水溶性更强的吖啶类化学发光衍生物。

吖啶酯标记核酸的方法：(1)DNA探针5’端、3’端保护；(2)吖啶酯标记：25mM NHS吖啶酯溶解于DMSO中，配置1M HEPES缓冲液(PH＝8.0)，按照摩尔比核酸探针：NHS吖啶酯＝1:5的条件，加入到HEPES缓冲液中，37℃反应1h；(3)HPLC纯化；有益效果：普通的方法一个核酸探针上只能在5’端标记一个吖啶酯，本发明方法创造性的在两端都标记了吖啶酯，在灵敏度上直接提升了1倍。

吖啶酯的优势非常明显。除了上述之外，吖啶酯化学发光过程的反应速度极快，而且它的本底低，即使反应中存在有氢氧化钠和过氧化氢，也可以照常发光。通过氧化还原反应的过程里，分解了结合物，但是游离吖啶酯的发光也是不会受到影响的。吖啶酯类化学发光试剂稳定性非常好，这就方便进行储存了。