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Tris、CAPS等生物缓冲剂使用浓度及注意事项

2020/11/14 13:30
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生物缓冲剂有很多种类,比如常用的TrisCAPSBicine等,这些试剂在用量多的情况都是粉末试剂,需要配制溶液。那么配溶液时是使用多少的浓度、有哪些注意事项呢?

不同的缓冲溶液应用于不同实验,其使用浓度也是不一样的。比如Tris的缓冲体系通常有:Tris-HCI Buffer200mMpH7.5Tris-HCI Buffer 0.05mol/LTris-HCl Buffer 1.0MTris-EDTA Buffer 0.01mol/L Tris1mM EDTApH 7.4CAPS的缓冲体系有CAPS Buffer 0.2mol/L、蛋白印迹10mM/1CAPS10%甲醇等。

缓冲液的使用是很广泛的,能抵抗外来少量酸碱或者反应体系中生成的酸碱,而维持体系pH值基本不变的溶液成为缓冲溶液。缓冲液通常由足够浓度和适当比例的共轭酸碱对组成(浓的强酸或强碱也有缓冲作用但因酸碱性过强很少使用)。

 

Tris等缓冲剂使用事项

Tris三羟甲基氨基甲烷)、CAPS、磷酸缓冲液等这些溶液虽然都有缓冲作用,但是这个缓冲作用是有一定范围和能力上限的。如果超过缓冲液允许pH范围或者在范围之内但是外来的酸碱的量过多,缓冲液会失去缓冲能力。

比如Tris-盐酸缓冲液,虽然是同样pH值的缓冲液,其Tris和盐酸的总浓度越大,缓冲容量也越大。缓冲溶液的pH值主要是共轭酸碱对的比例决定的,即Tris和盐酸的比例。当总浓度相同时,缓冲比越接近1它的缓冲容量越大。即总浓度相同时,Tris和盐酸1:1时缓冲容量最大。

TrisCAPS等只有缓冲比在0.1~10范围内才具有缓冲作用,比如Tris溶于水是不具缓冲液作用的,需要加盐酸、硼酸、甘氨酸等。能发挥缓冲作用的pH范围是其解离常数pKa加减1。通常配制溶液时,Tris需要加盐酸、CAPSBicine需要加氢氧化钠来调节pH值。

缓冲剂的选择上还有一些其它的需要注意,比如TrisCAPSBicine的使用浓度通常是0.050.2mol/L,但也有1M或者2M的高浓度缓冲液;使用Tris时需要考虑其与反应体系发生作用或与金属离子络合等,药用的缓冲液还必须考虑是否具有毒性等。

上述是生物缓冲剂基本的注意事项,需要了解更多缓冲剂种类的问题可以咨询德晟厂家。缓冲液配制直接按计算比例配制,要求精确配制用pH计测量校正即可。

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