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三羟甲基甲胺Tris在蛋白质电泳和蛋白质印迹中的使用

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三羟甲基甲胺Tris在蛋白质电泳和蛋白质印迹中的使用

2020/11/19 13:30
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三羟甲基甲胺Tris通常也称为氨丁三醇或三羟甲基氨基甲烷,在许多蛋白质与核酸相关的生物化学实验中应用非常广泛。因其离子强度小、缓冲能力大、缓冲范围适当等特点,许多蛋白质相关的实验中都会使用到Tris缓冲剂。

在蛋白质电泳和蛋白质印迹实验中,Tris缓冲液是必不可少的。基本上常见的缓冲液都可以提前预混合配制好,直接使用。像采购的SDS-PAGE凝胶或者琼脂糖凝胶预制胶有些的配套好了制备好的Tris缓冲液。

 

三羟甲基甲胺Tris试剂粉末

如果使用的量比较大的话,自己制作Tris缓冲液可以节约更多的成本。德晟的Tris试剂是纯化好的Tris粉末,使用时按操作要求配制不同比例、浓度、pH值的溶液即可,而且可以搭配上HCl、醋酸、硼酸、甘氨酸、EDTA等配制成不同的Tris缓冲体系。

大多数SDS凝胶使用不连续的Tris缓冲液系统。堆积凝胶通常具有pH 6.7-6.8的特性,该凝胶具有大的孔,以便较大的肽(或蛋白质片段)可以轻松迁移。在此pH值下,电离的氯离子迅速迁移,从而提高了它们背后的pH值,并在电导率低的区域产生了电压梯度,这导致甘氨酸(来自运行缓冲液)离子化并迁移到氯离子的后部。样品中的大多数肽由于结合了SDS而带负电荷,它们在氯化物和甘氨酸之间迁移,形成一条窄带,因此变成“堆积”的。

一旦堆叠到达pH较高(通常为pH 8.7-8.8)的分离凝胶,甘氨酸离子化的增加会导致其加速并超过肽段。另外,较小的分辨凝胶孔径开始具有筛分作用,导致按大小分离肽。

三羟甲基甲胺Tris也不与钙离子、镁离子等金属离子生成沉淀,不会影响到与金属离子相关酶的活性,保证了需要酶催化的生化实验的顺利进行,不过Tris溶液易吸收空气中二氧化碳,配制完成后待使用要注意密封。

 

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