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Tris缓冲液对核酸PCR实验有怎样的影响

2020/12/01 13:30
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三羟甲基氨基甲烷Tris由于其优秀的特性被广泛地用于各种核酸的研究实验中,比如DNA电泳、病毒核酸保存液、核酸PCR扩增实验等。核酸PCR是目前病毒核酸检测重要的检测方法,Tris对其有着怎样的影响呢?

Tris缓冲液在DNA的电泳、分离、纯化或PCR扩增实验中,主要是维持反应体系的pH稳定,保证反应中酶的活性和各生化反应的顺利进行。DNA的研究相关实验中的Tris缓冲体系通常由TrisEDTA、在加上醋酸、硼酸或甘氨酸等组成。PCR扩增试纸DNA或者RNA逆转录后的DNATaq酶的催化下进行复制的反应。

 

Tris缓冲液对核酸PCR有怎样的影响

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和镁离子Mg2+Tris缓冲剂(TE缓冲剂或TAETBE)有助于DNA的稳定,其中的EDTA,浓度1-2mmol/L,可螯合镁离子,防止电泳时激活DNA酶,防止镁离子与核酸生成沉淀。

镁离子PCR扩增的特异性和产量有显著的影响,在一般的PCR反应中,各种dNTP浓度为200umol/L时,Mg2+浓度为1.52.0mmol/L为宜。Mg2+浓度过高,反应特异性降低,出现非特异扩增,浓度过低会降低Taq DNA聚合酶的活性,使反应产物减少。

Tris不与PCR反应需要的镁离子生成沉淀,EDTA可以络合DNA在前处理的纯化过程中的少量镁离子,但EDTA浓度不可过高(一般1mM),这也就不会络合后续实验中镁离子对DNA聚合酶的辅助因子作用。另外一点,硼酸是酶的抑制剂,含硼酸的Tris缓冲体系也不能用于DNA的酶切反应。

总的来说,Tris缓冲液对核酸PCR实验的影响并不大,如果核酸检测出现假阴性或假阳性应该首先考虑Taq DNA聚合酶、dNTP、引物、模板等的问题。镁离子或Tris缓冲剂是不容易出现问题的。不过还是建议采用像德晟这样的生物缓冲剂厂家提供的高纯度TrisEDTA或其它试剂。

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