中文  |  EN

欢迎来到德晟生化科技有限公司!

搜索

咨询热线:18062302654

 

>
>
Tris缓冲液对核酸PCR实验有怎样的影响

精品案例

国内案例
国外案例

 

地址:湖北省鄂州市光谷联合科技城C8-2-2
电话:18062302654 
邮件:
18062302654@163.com
邮编:436032

CopyRight © 2019-2027    武汉德晟生化科技有限公司, All Right Reserved
鄂ICP备16017126号-1   网站建设:中企动力武汉

资讯详情

Tris缓冲液对核酸PCR实验有怎样的影响

2020/12/01 13:30
浏览量

三羟甲基氨基甲烷Tris由于其优秀的特性被广泛地用于各种核酸的研究实验中,比如DNA电泳、病毒核酸保存液、核酸PCR扩增实验等。核酸PCR是目前病毒核酸检测重要的检测方法,Tris对其有着怎样的影响呢?

Tris缓冲液在DNA的电泳、分离、纯化或PCR扩增实验中,主要是维持反应体系的pH稳定,保证反应中酶的活性和各生化反应的顺利进行。DNA的研究相关实验中的Tris缓冲体系通常由TrisEDTA、在加上醋酸、硼酸或甘氨酸等组成。PCR扩增试纸DNA或者RNA逆转录后的DNATaq酶的催化下进行复制的反应。

 

Tris缓冲液对核酸PCR有怎样的影响

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和镁离子Mg2+Tris缓冲剂(TE缓冲剂或TAETBE)有助于DNA的稳定,其中的EDTA,浓度1-2mmol/L,可螯合镁离子,防止电泳时激活DNA酶,防止镁离子与核酸生成沉淀。

镁离子PCR扩增的特异性和产量有显著的影响,在一般的PCR反应中,各种dNTP浓度为200umol/L时,Mg2+浓度为1.52.0mmol/L为宜。Mg2+浓度过高,反应特异性降低,出现非特异扩增,浓度过低会降低Taq DNA聚合酶的活性,使反应产物减少。

Tris不与PCR反应需要的镁离子生成沉淀,EDTA可以络合DNA在前处理的纯化过程中的少量镁离子,但EDTA浓度不可过高(一般1mM),这也就不会络合后续实验中镁离子对DNA聚合酶的辅助因子作用。另外一点,硼酸是酶的抑制剂,含硼酸的Tris缓冲体系也不能用于DNA的酶切反应。

总的来说,Tris缓冲液对核酸PCR实验的影响并不大,如果核酸检测出现假阴性或假阳性应该首先考虑Taq DNA聚合酶、dNTP、引物、模板等的问题。镁离子或Tris缓冲剂是不容易出现问题的。不过还是建议采用像德晟这样的生物缓冲剂厂家提供的高纯度TrisEDTA或其它试剂。

德晟新闻资讯

问题列表

Tris(三羟甲基氨基甲烷)是一种常见的生物缓冲液,可用于整个DNA提取过程。从多种来源提取过程中,DNA对pH敏感。在细胞裂解,去除不需要的细胞成分和沉淀过程中,可以使用tris来维持稳定的pH值。另外,它在细胞裂解中也起到特别重要的作用。
生物缓冲剂是电泳技术的重要组成部分,一般将其添加到溶液当中,以在电流通过样品时使pH稳定。此外,缓冲剂还能提供电泳迁移时所需的离子。
谷氨酸脱氢酶(简写GDH)是生物体代谢途径中一种重要的酶类。该酶广泛存在于各种高等植物、生物及动物体内,它在生物体内氮、碳代谢过程中起着至关重要的作用

联系德晟

地址:湖北省鄂州市光谷联合科技城C8
电话:18062302654

微信:whdsbio
邮件:
18062302654@163.com
邮编:436032
传真:0711-3704589