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POD/HRP酶的显色底物中Trinder’s试剂与TMB的区别

2021/01/15 17:05
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过氧化物酶POD或HRP常用于酶联免疫分析中能生成过氧化氢的生化指标的检测,比如血糖检测、血脂检测、尿酸检测等都能生成过氧化氢,POD/HRP酶的显色底物常用的有新型Trinders试剂和TMB试剂,它们有什么区别呢?

在有过氧化物酶存在的情况下,Trinders试剂和TMB都可以被过氧化氢(由血糖、血脂、尿酸等经过反应生成)氧化,生成有色产物,产物浓度与过氧化氢生成量以及待测指标含量成正比,因此可以通过分光光度计检测有色产物从而计算待测指标的含量。

 

POD/HRP酶的显色底物中Trinders试剂与TMB的区别

色原新型Trinders试剂显色原理:

首先色原新型Trinder’s试剂跟传统色原苯酚、苯胺有类似的地方,以N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺钠盐ADPS为例,在有或氧化氢和POD存在下与4-AA(4-氨基安替吡啉)进行耦联反应,苯胺的N变成C=N双键,对位上与4-AA的氨基结合成C=N双键,从而构成一种醌亚胺结构,跟对苯醌的C=O双键类似,吸收波长都在可见光区域,从而产生显色反应。所以这里的反应必须引入4-AA(或者MBTH)参与。

色原TMB试剂显色原理:

显色底物TMB(TMBZ)在ELISA试剂盒中应用较广泛,在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,抗原浓度与OD值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中抗原的浓度。它无需像色原ADPS、TOOS、MAOS等这些,需要引入另一种化合物(如4-AA,MBTH)来做颜色反应,但TMBZ需要在酸性条件(HCl)下作颜色反应,限制了它的应用。

过氧化物酶底物中新型Trinder’s试剂和TMB都可以用于试剂盒,其原理都是类似的,TMB的显色反应加终止液后由蓝变黄,测定波长在450nm,而Trinders试剂显色产物为红色,吸收波长540nm以上,MADB、MAOS更是达到了630nm,抗干扰能力更强。德晟除了研发HRP的显色底物之外,还有发光底物鲁米诺和直接发光试剂吖啶酯,灵敏度更高检测更精确。

 

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