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HRP化学发光底物的灵敏度到底有多高

2021/01/27 13:30
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以鲁米诺、吖啶酯等发光试剂为代表的化学发光免疫分析法是近年来非常热门的生化检测分析方法,该种方法以自动化程度高及超高的灵敏度著称。化学发光分析的相比与免疫比浊及酶联免疫分析,灵敏度要高很多。

免疫比浊、胶体金、酶联免疫分析相比于放射性免疫分析已经是比较先进了,灵敏度已经很高,检测的范围是毫克至微克,有的检出限或定量限能达到0.1μg/L,即几十到一百纳克;而化学发光的灵敏度更高,能达到皮克、飞克甚至几百阿克的级别。一个鸡蛋50克,1克是一千毫克,一毫克是一千纳克,然后皮克、飞克、阿克以此类推,均是一千倍。这就可以看到灵敏度之间的差距。

 

 

HRP化学发光底物灵敏度

常用的化学发光底物有辣根过氧化物酶HRP的底物与碱性磷酸酶AP底物。

1.HRP的化学发光底物

HRP的分子量约40kDa,已成为化学发光蛋白质印迹检测的常规酶,其化学发光底物有鲁米诺和异鲁米诺、也叫发光氨luminol,异鲁米诺经过修饰发光性能可以显著提高。HRP化学发光底物的改良和发展使其相较AP底物具有更高的蛋白质印迹检测灵敏度。其稳定性和较小的分子量使其应用逐渐普及,通过使每个IgG标记更多的分子,可实现更高的检测灵敏度。

用于辣根过氧化物酶(HRP)的化学发光底物多为双组分系统,由稳定的过氧化物溶液和增强型鲁米诺溶液组成。

  1. AP的化学发光底物

碱性磷酸酶(AP,86kDa)常用作蛋白质印迹检测,通过AP将底物去磷酸化,以产生亚稳定的二氧杂环丁烷酚盐阴离子中间体,该中间体在475nm波长下分解并发射具有最大强度的光, 发射光可在24-96小时内保持稳定,允许多次曝光。

除了HRP底物鲁米诺、异鲁米诺外,德晟还有直接化学发光试剂吖啶酯,与HRP底物及AP底物相比,它不需要酶催化就可直接发光,在自动化和定量检测上更有优势。

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