检测肝素钠不同种属来源的原理和方法是怎样的

目前，肝素钠主要来源于猪、牛或羊的肠黏膜。但是，牛源性和羊源性的肝素钢存在被相关病毒感染的风险，且导 致血小板减少症及血栓综合征等不良反应的发生概率要远远大于猪源性肝素钢。因此，在 临床使用中人们会应尽量选择猪源性肝素钠。然而，实际生产中由于生产材料来源复杂等 多方面原因，往往会导致猪来源的生产原料存在被牛、羊等来源的动物材料污染的可能性。 因此，建立猪源、羊源、牛源等动物来源成分的鉴别方法对控制药品质量、防止异种动物源性成分的污染至关重要。

下面简单说一下肝素钠不同种属来源的检测原理是怎样的，检测原理：肝素钠是一种糖胺聚糖，是由糖醛酸(L．艾杜糖醛酸，IdoA；D一葡糖糖醛酸，GlcA)和葡萄糖胺(6[．D一葡萄糖胺，GlcN)组成的具有不同链长的多糖链的混合物。通过肝素酶酶解不同种属来源的肝素钠，分析研究其酶解产物；即通过酶解产物(二糖混合物)的组成比例对本品的种属来源进行表征。

肝素酶是一类作用于肝素或者硫酸乙酰肝素分子的多糖裂解酶；肝素酶有3种类型，即肝素酶I、肝素酶II和肝素酶III。由于每一种肝素酶有独特的基质特异性，因此它们切开肝素链中特定的位点。肝素酶1分解GlcNs(6S)和IdoA(2S)连接的0c(1—4)糖苷键，并能切断肝素分子中的抗凝血酶III结合五糖位点；肝素酶Ⅱ能分解二糖中含2个或者3个硫酸化基团的肝素，因此其特异性不强；肝素酶II1分解含6位未硫酸化的GIcNS或Ⅳ．乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)的肝素(见图1)。3种肝素酶的恰当混合使用，可使肝素完全降解为不饱和的、在234nm有紫外吸收的二糖混合物。

关于肝素种属来源的检测主要是通过定量PCR检测鉴别不同种属来源的肝素钠，但这种方法成本较高。肝素酶酶解法能有效地鉴别出混入羊来源粗品肝素的肝素样品，同时简便快捷，唯一的不足是肝素酶在酶解肝素的过程中会丢失糖醛酸差向异构体的信息，不能区分葡糖醛酸和艾杜糖醛酸。另外近年也有利用毛细管电泳分离各种双糖的方法。利用反相离子对色谱法也可分离肝素双糖，并结合质谱检测进行定量分析。

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