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Bicine、HEPES及EPPS缓冲液的配制方法

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Bicine、HEPES及EPPS缓冲液的配制方法

2021/02/02 17:05
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生物缓冲剂是生化实验研究中应用最广泛的一种辅助试剂之一,其中比较典型缓冲剂的有二羟乙基甘氨酸Bicine羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES、羟乙基哌嗪丙磺酸EPPS(或HEPPS)等等。

像这些生物缓冲剂在反应体系中不会直接参与反应或者对检测相关反应产生影响,是作为调节反应环境的pH值的,但作用却是不可或缺的。大多数生化反应原本都是在生物体内进行的,而且通常都需要有酶的催化进行调节,酶的活性需要在合适的pH下才能表现。生物体内都有各自的体系来调节pH值,比如人体就可以通过CO2HCO3-的平横来调节。那么,在体外实验时就不需要用BicineHEPESEPPS等这样的缓冲剂来维持合适的pH值。

BicineHEPESEPPS缓冲液的配制

Bicine缓冲液的配制方法

(1)0.1M溶液(A):Bicine16.317g/去离子水1,000ml

(2)0.1MNaOH溶液(B):NaOH4g/去离子水1,000ml

(3)pH5.11,000ml(A)+0ml(B)(A):(B)=5:0

pH7.81,000ml(A)+200ml(B)(A):(B)=5:1

pH8.21,000ml(A)+400ml(B)(A):(B)=5:2

pH8.61,000ml(A)+600ml(B)(A):(B)=5:3

pH10.41,000ml(A)+800ml(B)(A):(B)=5:4

HEPES缓冲液的配制方法

(1)0.1M溶液(A):HEPPS25.233g/去离子水1,000ml

(2)0.1MNaOH溶液(B):NaOH4g/去离子水1,000ml

(3)Bicine配制方法类似,将HEPESNaOH溶液按比例混合即可。

EPPS缓冲液的配制方法

(1)0.1M溶液(A):EPPS25.233g/去离子水1,000ml

(2)0.1MNaOH溶液(B):NaOH4g/去离子水1,000ml

(3)AB两种溶液按比例混合,并根据pH值调节

可以看出,BicineHEPESEPPS这三种缓冲剂在配制方法是都是比较类似的,都是以氢氧化钠碱液来调节pH值,按比例混合可以得到特定pH值的缓冲溶液,如果需要比较准确的pH值,需要测量一下pH,根据需要调节混合比例。

需要注意的是:配制温度控制在20度左右;如果检测环境需要排除钠离子,用氢氧化钾代替氢氧化钠也是可以的,按对应的分子量改变称量的质量即可。德晟是专门生产缓冲剂原料的厂家,提供包含BicineHEPESEPPS在内的多种生物缓冲剂原料。

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生物缓冲剂是电泳技术的重要组成部分,一般将其添加到溶液当中,以在电流通过样品时使pH稳定。此外,缓冲剂还能提供电泳迁移时所需的离子。
谷氨酸脱氢酶(简写GDH)是生物体代谢途径中一种重要的酶类。该酶广泛存在于各种高等植物、生物及动物体内,它在生物体内氮、碳代谢过程中起着至关重要的作用

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