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羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES与碳酸氢钠用于细胞保存液

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羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES与碳酸氢钠用于细胞保存液

2021/02/27 17:05
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羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES通常与碳酸氢钠搭配,一起作为细胞保存液或细胞培养液中的缓冲体系,在需要细胞培养的非灭活病毒核酸保存液中,也含有添加HEPES成分的Hanks细胞培养液。

羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES的解离常数为7.5,缓冲范围6.8-8.2,而大多数细胞所需的pH也是在7.2-7.4,部分细胞培养的最适pH能达到7.07.7,都是在HEPES适合的缓冲范围之类,非常适合大多数细胞的培养。

 

HEPES用于细胞保存液配置

在生物体的细胞内,最主要的缓冲体系是碳酸氢盐和二氧化碳,以维持生命活动和细胞代谢的正常pH值,所以多数细胞培养液也是依靠碳酸氢盐(一般是碳酸氢钠)与CO2体系进行缓冲。

CO2在溶液中是不稳定的,气相中的CO2浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡。如果气相或培养箱空气中CO2浓度设定在5%,培养液中NaHCO3的加入量为1.97g/L;如果CO2浓度维持在10%,培养液中NaHCO3的加入量为3.95g/L而且细胞培养瓶或其它容器不宜密封得太严,以保证CO2气体交换。碳酸氢盐稳定性不太好,长时间存放或者温度上升时都会散发出CO2随空气散逸开来,使体系pH值升高。

开放式培养或观察细胞时,往碳酸氢钠缓冲体系中加入10-25mMHEPES,则可以改善溶液pH变化太快的问题,使培养液维持较恒定的pH值。HEPES相对碳酸盐缓冲液来说要昂贵许多,原则上可以完全代替碳酸氢盐,环境CO2浓度不够高时碳酸氢盐会向碱性方向水解使pH升高。

在实际的细胞培养中,只用HEPES不用NaHCO3也是不好的,碳酸氢盐与溶解的CO2对良好的细胞生长也是很重要的;而且HEPES在一定程度上会提高细胞培养体系的渗透压,在浓度过高时,可能有一定的细胞毒性。

可以看出HEPESNaHCO3在细胞培养液中都是缓冲剂,有着各自的优点和作用,其中德晟生产优质的HEPES原料,可自行配置溶液。HEPES对细胞的无毒副作用不是绝对的,建议使用浓度在10-50mmol/L

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Tris(三羟甲基氨基甲烷)是一种常见的生物缓冲液,可用于整个DNA提取过程。从多种来源提取过程中,DNA对pH敏感。在细胞裂解,去除不需要的细胞成分和沉淀过程中,可以使用tris来维持稳定的pH值。另外,它在细胞裂解中也起到特别重要的作用。
生物缓冲剂是电泳技术的重要组成部分,一般将其添加到溶液当中,以在电流通过样品时使pH稳定。此外,缓冲剂还能提供电泳迁移时所需的离子。
谷氨酸脱氢酶(简写GDH)是生物体代谢途径中一种重要的酶类。该酶广泛存在于各种高等植物、生物及动物体内,它在生物体内氮、碳代谢过程中起着至关重要的作用

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