吖啶酯标记核酸DNA的方法
发布时间：
2021-03-04
化学发光试剂吖啶酯是CLIA中重要的检测试剂，外观成黄色粉末，它的检测灵敏度非常高，逐渐成为国内体外诊断领域主流的检测手段。能被吖啶酯检测标记的对象包括蛋白质、抗体、核酸DNA或RNA等，适应范围广。
在体外诊断方面，吖啶酯化学发光试剂很适合于标记DNA链以制造化学发光DNA探针，本文将介绍一种吖啶酯标记核酸的方法。
化学发光试剂吖啶酯
核酸是所有生物分子中最重要的物质，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内，核酸分为脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）两大类。现代医学研究成果表明，许多疾病如癌症和遗传疾病的发生都与DNA的突变有关，且许多传染性疾病是由环境中的病毒、病菌或寄生虫引起的，因此，对病毒特定序列DNA的分析有利于疫情的控制。
在核酸杂交分析中，制备特异性强、灵敏度高的标记探针是核酸杂交分析成功的关键，吖啶酯衍生物可以直接标记在核酸探针上，不需催化剂且发光量子产率不受影响；另外，在一定条件下，未杂交的单链DNA上标记的吖啶酯被水解破坏，只有杂交形成的双链保护的吖啶酯才能产生化学发光，不需分离即可监测整个杂交过程。
这种吖啶酯标记核酸的方法，主要包括3个步骤，首先分别对DNA探针5’端、3’端进行保护；然后进行吖啶酯标记，最后HPLC纯化分离DNA。其中吖啶酯标记最为关键，将25mM 吖啶酯溶解于二甲基亚砜（DMSO）中，配置1M HEPES缓冲液(PH＝8.0)，按照摩尔比核酸探针：吖啶酯＝1:5的条件，加入到HEPES缓冲液中，37℃温度下反应1h。
这种方法创造性的在DNA两端都标记了吖啶酯，进一步提升了检测的灵敏度。吖啶酯具有反应条件温和、重现性好、发光效率高、发光强度强等优点，广泛应用于无机有机化合物、环境监测、生物及药物分析等领域，另外也普遍用于多种类型疾病的灵敏检测和诊断。
吖啶酯化学发光试剂包含吖啶酯与吖啶磺酰胺两种类型，德晟研发的共有六种吖啶酯试剂，可满足标记蛋白质、抗体、核酸等分子的不同需求。
吖啶酯,化学发光试剂
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