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吖啶酯发光底物标记抗体抗原的方法

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吖啶酯发光底物标记抗体抗原的方法

2021/03/18 13:30
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化学发光底物吖啶酯可以直接标记蛋白、抗体、核酸等,不同的吖啶酯其标记方法也有差异,大致的标记方法类型将在本文作简介。

按照标记物的应用可以分为化学标记和生物标记;标记的对象可以是小分子物质,如甾体激素、药物等,也可以是大分子物质,如蛋白质、抗体、抗原、核酸以及某些配基、和载体;标记的过程可以是直接偶联(如碳二亚胺缩合)或间接偶联(如琥珀酰亚胺活化)。

吖啶酯发光底物

碳二亚胺(EDC)缩合法:

此法可用于蛋白质分子中游离羧基或氨基的标记,常用缩合剂有EDCDCC等。5 号为吖啶NSP-SA为含羧酸基团的吖啶酰胺,需要加入缩合剂 EDCI 等,才能与含胺基的蛋白发生偶联反应。

重氮盐偶联法(重氮化):

此法简易、成本低、重复性好,但不适用于脂肪伯氨基发光剂,因其生产的重氮盐不稳定,且异鲁米诺衍生物ABEI等伯伯胺基位于侧链的也不适用。

琥珀酸酐法(环内酸酐法):

此法没有双功能交联剂的不良反应,能实现标记物和蛋白质分子间的单向定量缩合,标记效率高,商品化试剂供应成熟。我们含有NHS活化基团的吖啶酯( 14 号)都属于这一类,能与抗体、蛋白的胺基进行偶联,直接标记。

还有异鲁米诺常用的异硫氰酸酯衍生物法,以及过碘酸盐氧化法、戊二醛法、O-(羧甲基)羟胺法、混合酸酐法,但由于或多或少的使用限制,不去前几种广泛。

一般来说鲁米诺等酶促化学发光底物通常不直接标记,鲁米诺氨基发生取代后发光性能受到显著影响(异鲁米诺则可以改善),所以通常采用催化的酶(如HRPPODGOD)和/或协同因子(如ATP、辅酶NAD等)来标记抗体或抗原。但是吖啶酯的优势是可以连接带有能够标记的基团,可直接标记抗体或核酸,发光性能几乎无影响。

综上所述,德晟的六种吖啶酯除了抗水解性、亲水性的不同外,其标记方法也是有差异的,大家可以根据标记的蛋白、抗体类型作选择。

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