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化学发光试剂吖啶酯、吖啶盐等的区别

2021/03/24 13:30

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化学发光试剂吖啶酯有很多类型，一般统称吖啶酯类，还包括吖啶盐、吖啶磺酰胺、吖啶羧酸等，那么它们之间有什么区别呢？

目前德晟研发的吖啶酯类化学发光试剂共有六种，分别在传统吖啶酯的基础上进行了官能团的取代，在发光性能、稳定性和便于标记蛋白、抗体方面做了优化改性。传统吖啶酯及六种新型吖啶酯如下：

0# AE-NHS

1# DMAE-NHS

2# Me-DMAE-NHS

3# NSP-DMAE-NHS

4# NSP-SA-NHS

5# NSP-SA

6# NSP-SA-ADH

抗水解性不同：

传统吖啶酯0#（AE-NHS），1～3#在其结构上进行了修饰，增大了位阻，增强了抗水解性。0#只在酸性溶液中稳定，当pH值大于6.3后易水解，而1～3#则不然，如在室温下，在pH为7.0的PB缓冲液中很稳定，16天后，发光活性只降低3.6％。

稳定性不同：

4#、5#、6#吖啶酯则是引入了磺酰胺基团，其稳定性较吖啶酯类（0#、1#、2#、3#）高，其原因是由于C-N键与C-O键的键级不同，C-N键大于C-O键。吖啶酰胺类化合物（4～6#）抵抗水解的能力也强于吖啶酯类（0～3#）化合物。4～6#在酸性溶液中(pH<4.8)都很稳定，与蛋白质偶联物在室温下保存4周，其光量子产率不降低，冻干品在-20℃下，可以保存一年以上。

发光原理相同，离去基团不同：

吖啶酯和吖啶磺酰胺的反应机理是相同的，只是离去基团不团。在碱性条件下，过氧化氢与吖啶的9位碳原子发生加成，加成产物在碱性条件下形成的过氧负离子再亲核进攻羰基碳，离去基团离去并进一步形成不稳定的四元环中间体1，2-二氧杂环丁烷酮，开环后形成激发态的吖啶酮，其返回到基态的过程中释放出光子，波长为470nm。吖啶酯和吖啶磺酰胺的离去基团分别为-OR和-NR（SO2R），当离去基团上R3，R4为给电子基团时（如R3，R4 =CH3），能起到增大空间位阻的同时降低羰基亲电性。