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化学发光试剂吖啶酯标记蛋白的效率

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化学发光试剂吖啶酯标记蛋白的效率

2021/03/24 17:05
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吖啶酯为核心的化学发光免疫分析是目前主流的体外诊断分析方法之一,具有超高的灵敏度,且检测方法易于自动化设计。吖啶酯可以标记蛋白质、核酸、抗体、多肽等各种分子,本文介绍其标记蛋白的效率计算方法。

目前,市场上使用的吖啶酯是经过传统吖啶酯改进研发而成的,发光效率更高,热稳定性更好,亲水性更强,可以使用配备自动进样器的多功能酶标仪进行发光数据采集。该化学发光试剂光量子产率高、背景低,与蛋白、抗原,抗体等偶合后,发光效率几乎不受影响,从而成为优良的化学发光免疫分析标记试剂。

吖啶酯粉末

吖啶酯标记蛋白

  1. 100uL 待测样品,稀释直到其在280nm处的吸光度(Absorbance at 280nm)为0.1~1.5之间。
  2. 1中加入少量盐酸,调整至pH值为1~2,使其形成具有黄色特征的盐溶液,吸收峰在367nm
  3. 分别测试待测样品的吸光度Abs280nmAbs367nm
  4. 计算公式Equation1: 吖啶酯浓度(mol/L)=Abs367/14650
  5. 校正蛋白Abs280数值公式Equation2: Abs280(校正后) = Abs280- (Abs367×0.17);
  6. 准备1mg/ml未标记的蛋白溶液(e.g. 50ug 蛋白加入50µL标记缓冲液),取出10µL 并补加490µL ddH2O (稀释50)。读取Abs280nm ,并乘以稀释倍数。
  7. 计算蛋白质量浓度(mg/ml计算浓度比值即得出吖啶酯标记蛋白效率。

吖啶酯标记蛋白具有很多优势,比如吖啶酯DMAE-NHS、吖啶酯NSP-DMAE-NHS,本身含有的琥珀酰亚胺基团可以直接与蛋白质上的一级氨基发生取代,从而进行标记。而且吖啶酯本身不会发光,只有加激发液之后才会发光,这样就避免了背景干扰,提高了检测的准确性、灵敏度。

吖啶酯除了可以标记蛋白之外,也可以用来标记抗体,比如新冠的化学发光抗体检测,为了满足不同的标记对象,德晟一共研发了6种不同的吖啶酯或吖啶磺酰胺。

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