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4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)在狂犬病毒检测中的应用

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4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)在狂犬病毒检测中的应用

2021/04/02 13:30
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4-羟乙基哌嗪乙磺酸,英文简称HEPES,CAS号:7365-45-9,颜色为白色晶体粉末,PH值范围为6.8-8.2,它的应用最常见的是作为生物缓冲剂调节PH值,在护肤品中的应用也深受各大厂商喜爱,它狂犬病毒检测中的应用常常不为人知,今天德晟小编就为大家普及一下相关的知识

狂犬病毒在感染细胞内繁殖时一般不产生细胞病变(CPE),在常规培养条件下也不易形成蚀斑虽然国内外不少学者已在鸡胚细胞、BHK-21细胞建立了狂犬病毒蚀斑方法,但这些方法或是实验条件要求严格,或是操作繁杂难于掌握,影响了其推广使用。研究人员发现4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES能增强狂犬病毒对感染细胞的致病变作用之后,利用HEPES的这一特性建立了狂犬病毒的简易快速的HEPES蚀斑方法。

HEPES对狂犬病毒蚀斑形成的促进作用

感染细胞37℃ 培养3~5天后,经HEPES处理的感染细胞在覆盖物底部产生明显的细胞病变,用结晶紫染色后即可见清楚的蚀斑形成,而未用HEPES处理的感染细胞组则既无细胞病变产生,也无蚀斑形成。由此可见HEPES对狂犬病毒在BHK细胞上的蚀斑形成有明显的促进作用。

HEPES蚀斑法的敏感性观察

HEPES蚀斑法可用于病毒感染滴度的滴定,实验表明病毒感染后形成的蚀斑数与病毒稀释度之间有明显的滴度关系。用HEPES蚀斑法和小鼠法对同份狂犬病毒CTN-BHK株的感染滴度进行测定,结果表明,用HEPES蚀斑法连续测定4次所得蚀斑数范围在1.0×10°~4.0×10*PFU/m1.而用小鼠法连续测定4次所得感染滴度在6.0~6.8log或1.0×10°~6.3×10/ml。这说明快速HEPES蚀斑法与小鼠法有一致的敏感性。

HEPES蚀斑法的优势

利用狂犬病毒CTN-181株和CTN-BNK株研究感染滴度滴定法,结果表示用HEPES能诱导增强经犬病毒对感染细胞的致病变作用,当病毒感染细胞后在37℃培养3~5天即在甲基纤维素半固体培养基覆盖物上面滴加50~00mmol/LHEPES,24小时后用结晶紫液染色,室温晾干后即可肉眼计算蚀斑数。该蚀斑方法与以往文献报道的虫斑方法相比具有快速、简便、经济、敏感和易于掌握等优点。

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