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TOPS酶光度法测定游离脂肪酸

2021/04/07 13:30
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TOPS属于新型Trinders试剂中的一种,灵敏度高、特异性好、干扰少,适用于多种生化指标的检测,例如试剂盒中用TOPS酶光度法测定血清游离脂肪酸含量。

游离脂肪酸即非酯化脂肪酸NEFA,是人体内脂肪的水解产物,反映人体脂肪代谢情况及血脂水平,其含量过高或者过低都说明身体可能出现病症。目前游离脂肪酸的检测主要是通过试剂盒检测,通常使用的是酶法测定,反应原理大都基于Trinder反应模式,具体反应过程如下:

TOPS测定游离脂肪酸原理

血清样本中的游离脂肪酸(NEFA)与ATP、辅酶A(CoA)在脂酰辅酶A合成酶的催化下反应生成脂酰辅酶A(Acyl-CoA)、AMP和磷酸(PPi)。Acyl-CoA在脂酰辅酶A氧化酶的催化下,氧化成烯脂酰辅酶A(Enoyl-CoA)和过氧化氢,最后过氧化氢在过氧化物酶的催化下与4-氨基安替比林和TOPS反应生成红色醌亚胺化合物。

TOPS色原底物

TOPS测定游离脂肪酸方法优化:

反应中H2O2会与辅酶A上的巯基结反应消耗部分H2O2,这样就导致显色产物减少,由此测定的游离脂肪酸浓度也相应的减少,改良优化方法:

1.加入N-乙基顺丁烯二酰亚胺可解决,但试剂不稳定,且会与脂酰辅酶A氧化酶发生反应。

2.加入金属离子Pb、Ag、Hg、Cr中的一种或几种,如Pb(NO3)2、AgNO3),使得金属离子能够与辅酶A上的巯基发生了离子交换和配位反应形成稳定的螯合物,消除了辅酶A上的巯基对过氧化氢产生的影响。从而实现了提高游离脂肪酸检测试剂盒准确性、增加试剂盒稳定性的目的。

运用Trinders色原测定游离脂肪酸除了采用TOPS之外,也可以用TOOS、ADPS等色原底物,德晟研发生产的色原底物有十种,包含TOOS、TOPS、MAOS等,还有配套的缓冲剂与酶制剂。

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