HEPES缓冲液对肺炎支原体培养效果的影响

HEPES（4-羟乙基哌嗪乙磺酸）是一种氢离子缓冲剂，有较好的PH缓冲能力，可有效缓冲体系的PH值变化。在细胞培养过程中，经常少不了它的存在。我们来看看它在肺炎支原体培养中起到了哪些效果？

肺炎支原体

肺炎支原体是人类呼吸道感染的重要病原微生物之一。常规肺炎支原体培养使用液体培养基（PH 7.0-7.4）葡萄糖作为其生长代谢重要的碳源。但由于培养过程中随着代谢产物乳酸堆积，培养基pH值会迅速下降，过低的pH值对于肺炎支原体生长不利，从而使其进入衰亡期。因此肺炎支原体培养过程中需要密切注意其增值与PH值变化情况，防止培养过程中由于PH下降造成肺炎支原体迅速死亡而无法分离到活的支原体。

HEPES缓冲液

低毒性 HEPES 是常用细胞培养缓冲剂，使用终浓度一般为10～50 mmol/L，通常情况下培养液内含20 mmol/L HEPES 即可起到缓冲作用，细胞培养常用浓度为10 mmol/L。HEPES 缓冲液在此过程中发挥了缓冲作用，且浓度越大缓冲效果越明显。当培养基 pH 在 6.8 左右时，培养的肺炎支原体进入了对数生长中后期；培养基PH在 6.5～6.0之间，培养基中的肺炎支原体含量达到平台期，菌量维持在很大水平。

随着培养基中 HEPES 浓度增加，培养基的缓冲能力相应增强，理论上可使培养的肺炎支原体的量增加，且平台期相应延长。但在实际培养过程中只有10 mmol/L HEPES 缓冲液培养的肺炎支原体量显著提升，HEPES可能对肺炎支原体生长有一定的抑制作用。随着 HEPES 浓度增加，这种抑制作用一定程度上迟滞了培养过程中菌量的增加，只表现为培养过程的平台期的延长。10 mmol/L HEPES 对肺炎支原体抑制作用较小，且仍有一定缓冲能力，但由于缓冲能力有限，其产生的过量酸性物质无法得到有效缓冲，培养基 pH 值迅速下降，使其衰亡期生长与未添加HEPES培养类似。

所以，培养基中添加10～80 mmol/L不同浓度 HEPES均可影响肺炎支原体的生长。10 mmol/L HEPES可提高肺炎支原体液体培养的最大CCU，对于肺炎支原体这种个体微小、培养浓度低的难培养微生物，在蛋白提取、抗原分析、菌株保存等需要获取大量培养物时，可节约培养成本，提高支原体收集效率。50 mmol/L HEPES 尽管不能显著提升液体培养的CCU，但其在肺炎支原体培养过程中可延长生长平台期，使其培养传代的判断难度降低，有利于观察肺炎支原体生长状态，避免因经验欠缺造成传代时机不当引起的培养失败。