HEPES缓冲液对肺炎支原体培养效果的影响

发布时间:

2021-04-07


HEPES4-羟乙基哌嗪乙磺酸)是一种氢离子缓冲剂,有较好的PH缓冲能力,可有效缓冲体系的PH值变化。在细胞培养过程中,经常少不了它的存在我们来看看它在肺炎支原体培养中起到了哪些效果?

肺炎支原体

肺炎支原体是人类呼吸道感染的重要病原微生物之一。常规肺炎支原体培养使用液体培养基(PH 7.0-7.4)葡萄糖作为其生长代谢重要的碳源。但由于培养过程中随着代谢产物乳酸堆积,培养基pH值会迅速下降,过低的pH值对于肺炎支原体生长不利,从而使其进入衰亡期。因此肺炎支原体培养过程中需要密切注意其增值与PH值变化情况,防止培养过程中由于PH下降造成肺炎支原体迅速死亡而无法分离到活的支原体。

HEPES缓冲

低毒性 HEPES 是常用细胞培养缓冲剂,使用终浓度一般为1050 mmol/L,通常情况下培养液内含20 mmol/L HEPES 即可起到缓冲作用,细胞培养常用浓度为10 mmol/LHEPES 缓冲液在此过程中发挥了缓冲作用,且浓度越大缓冲效果越明显。当培养基 pH 6.8 左右时,培养的肺炎支原体进入了对数生长中后期培养基PH 6.56.0之间,培养基中的肺炎支原体含量达到平台期,菌量维持在大水平。

随着培养基中 HEPES 浓度增加,培养基的缓冲能力相应增强,理论上可使培养的肺炎支原体的量增加,且平台期相应延长。但在实际培养过程中只有10 mmol/L HEPES 缓冲液培养的肺炎支原体量显著提升,HEPES可能对肺炎支原体生长有一定的抑制作用。随着 HEPES 浓度增加,这种抑制作用一定程度上迟滞了培养过程中菌量的增加,只表现为培养过程的平台期的延长。10 mmol/L HEPES 对肺炎支原体抑制作用较小,且仍有一定缓冲能力,但由于缓冲能力有限,其产生的过量酸性物质无法得到有效缓冲,培养基 pH 值迅速下降使其衰亡期生长与未添加HEPES培养类似

所以,培养基中添加1080 mmol/L不同浓度 HEPES均可影响肺炎支原体的生长。10 mmol/L HEPES可提高肺炎支原体液体培养的最大CCU,对于肺炎支原体这种个体微小、培养浓度低的难培养微生物,在蛋白提取、抗原分析、菌株保存等需要获取大量培养物时,可节约培养成本,提高支原体收集效率。50 mmol/L HEPES 尽管不能显著提升液体培养的CCU,但其在肺炎支原体培养过程中可延长生长平台期,使其培养传代的判断难度降低,有利于观察肺炎支原体生长状态,避免因经验欠缺造成传代时机不当引起的培养失败。

HEPES,4-羟乙基哌嗪乙磺酸