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色原底物TOPS测定游离脂肪酸步骤

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色原底物TOPS测定游离脂肪酸步骤

2021/04/14 17:05
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血清中游离脂肪酸(FFA)的测定是一项重要的生化检测指标,FFA与人体健康与否息息相关。由于血清成分复杂且FFA的种类较多,检测受干扰因素多,所以通常采用色原底物TOPS来测定FFA

色原底物TOPS试剂

色原TOPS测定FFA步骤:

  1. 在容器中先加入按配方比例已称量好的缓冲液,然后依次加入ATP、辅酶A4-氨基安替比林、离子激活剂氯化镁、稳定剂BSA、防腐剂,加入适量水后加入表面活性剂,用浓盐酸调节PHpH6-9,最后加入酰基辅酶A合成酶,然后搅拌过滤,所得滤液中再加入蒸馏水到定量得试剂A 
  2. 在容器中加入缓冲液,然后依次加入色原TOPS水、表面活性剂,调节PHpH6-9,最后加入HRP乙酰CoA氧化酶,然后搅拌过滤,所得滤液中再加入蒸馏水到定量得到试剂B
  3. 将上述试剂灌装分至小瓶,在2-8°C保存取试剂A与样本以一定比例混匀,孵育一定时间,读取吸光值A1加入试剂B混匀,孵育一定时间,读取吸光值A2样本中FFA浓度=标准液浓度Χ(ΛΑ_/ΛΑ_#)ΛΑ_=Α2-A1 

配制缓冲液:

在洁净的玻璃容器中首先加入按配方比例已称量好的HEPES缓冲液(Goods缓冲液即两性离子缓冲液,包括HEPESTrisMESMOPS),加入适量水后加入表面活性剂5ml/L TritonX-100,用浓盐酸调节pHpH6-9,用量约为5ml/L,然后搅拌过滤,所得滤液中再加入蒸馏水到定量。

TOPS作为色原底物检测血清或血浆FFA方法精确度高、测量误差小,而且在众多Trinders色原中受乙酰CoA小、稳定性高、摩尔吸光系数大几项标准中最合适的色原。德晟生产的色原底物除了TOPS之外,还有TOOSMAOSADPS等,适合血糖等其它生化指标检测。

 

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