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关于猪源胰蛋白酶您应该了解这些知识

2021/05/09 13:30
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什么是胰蛋白酶

胰蛋白酶(C6H15O12P3)为蛋白酶的一种。在脊椎动物中,作为消化酶而起作用。在胰脏是作为酶的前体胰蛋白酶原而被合成的。作为胰液的成分而分泌,受肠激酶,或胰蛋白酶的限制分解成为活化胰蛋白酶,是肽链内切酶,它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断。它不仅起消化酶的作用,而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体,起活化作用。是特异性最强的蛋白酶,在决定蛋白质的氨基酸排列中,它成为不可缺少的工具。

猪源胰蛋白酶介绍

猪源胰蛋白酶原相对分子质量约为 24 000,按等电点不同,猪源胰蛋白酶原可分为阴离子型(pl<6.8)和阳离子型(pl>6.8)。因阳离子型不仅比重较大,且稳定性优于阴离子型,故选择阳离子型猪源胰蛋白酶原进行构建、表达。猪源胰蛋白酶原含有 12 个半胱氨酸,可形成6对二硫键向(30-16048-64132- 233139-206171-185196-220),这极大地增加了后续实验中包涵体变性与复性的难度。

 

猪源胰蛋白酶的应用

猪源胰蛋白酶胰蛋白酶的一种,可作为添加剂,用于表面黏附细胞的脱壁,流感病毒疫苗、胰岛素和其他蛋白质的生产,蛋白的快速水解以及动物细胞组织的前处理等,故市场上对纯度高、活性强的胰蛋白酶需求量较大。目前已经确立了一种重组猪源胰蛋白酶原的制备工艺,所得重组猪源胰蛋白酶的酶活力较好,且不含其他动物源污染,为工业化研究生产提供了一定的实验基础。

猪源胰蛋白酶的性质特点

猪源胰蛋白酶性质不稳定,易发生自溶作用,在选择构建重组猪胰蛋白酶原表达系统时,该自溶特性使真核表达系统很难获得完整的胰蛋白酶原,且活化后产物对宿主细胞也会产生毒性,故考虑选择原核表达系统此外,该自溶特性要求猪源胰蛋白酶原的激活条件也需严格控制。

猪源胰蛋白酶的制备方法

传统制备方法中分离纯化的步骤多、时间长,易对蛋白造成破坏以致失活。导致产率偏低。因此,猪源胰蛋白酶的制备生产,已逐步由从动物胰脏中提取向重组表达生产过渡。通过构建重组猪源胰蛋白酶原的大肠埃希菌表达系统生产胰蛋白酶,还可避免因供体动物源性所致相关病原体污染以及携带未知病毒的风险。

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