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过氧化物酶与其底物如何用于生化检测

2021/05/11 17:05
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过氧化物酶POD是体外诊断领域应用较普遍的一种酶制剂的之一,很多生化检测如Trinder’s试剂酶法检测、ELISA酶联免疫、鲁米诺化学发光免疫等,这些相关的底物都会使用POD(或HRP)作为催化酶制剂。

过氧化物酶催化底物鲁米诺

过氧化物酶介绍

市售的过氧化物酶通常是辣根中提取的辣根过氧化物酶(HRP),分子量在40,000左右,是一种含亚铁血红素的蛋白质,等电点7.2;易溶于水,溶解度为5%(W/V),溶液呈棕红色,透明;也溶于0.58饱和度以下的硫酸铵溶液,而0.62饱和度以上则不溶。该酶最适pH为7.0(对愈创木酚为氢给体而言)。在室温下HRP在几周内保持稳定,加热到63℃后15分钟内稳定。

过氧化物酶与色原底物新型Trinder’s试剂

新型Trinder’s试剂如TOOS、MAOS、ADPS等是过氧化物酶重要的色原底物,在Trinder反应中,POD为催化剂,过氧化氢为氧化剂,Trinder’s试剂与4-AAP耦联作为氢供体即还原剂,最终生成显色产物红色醌亚胺类物质。显色产物的量与过氧化氢含量成正比,通过分光光度计可测量显色产物的量。该反应可用于能生成过氧化物氢的待测指标的检测,如血脂、血糖、胆固醇、肌酐等的生化项目检测。

过氧化物酶与底物TMB

TMB即四甲基联苯胺,也是POD的一种显色底物,在ELISA试剂盒中大量应用。联苯胺的氧化显色原理与Trinder’s试剂类似,不过它对细胞有至突变性(致癌变),TMB是在联苯胺的基础上改进的产品,消除了致突变型。

过氧化物酶与发光底物鲁米诺

过氧化物酶除了色原底物外还有发光底物,鲁米诺、异鲁米诺、ABEI等都是POD常用的发光底物。鲁米诺在碱性及POD存在下,可被过氧化氢催化产生化学发光,用光度计可以进行测量。

过氧化物酶的底物还有其它类型,不过这几种是应用较多的,相对来说其发光底物鲁米诺的灵敏度更高。另外鲁米诺能检测微量血迹也是优于血液中含有血红蛋白的缘故。德晟可提供过氧化酶检测体系的各种色原底物、发光底物、以及相关的酶制剂和缓冲剂。

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