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化学发光试剂吖啶酯标记抗HIV-1p24抗体

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化学发光试剂吖啶酯标记抗HIV-1p24抗体

2021/05/12 13:30
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化学发光试剂吖啶酯是化学发光免疫分析中常用的标记物,艾滋病病毒可通过抗原p24的来检测和诊断,实验中以抗原与抗体的特异性免疫反应为基础,以吖啶酯直接标记抗HIV-1p24抗体来检测。

吖啶酯CLIA检测原理:

吖啶酯作为化学发光免疫标记物与联酶免疫中的酶原理类似,只是标记物或指示物不一样,一个是通过发光检测一个是通过显色(比色)检测。吖啶酯的CLIA中用光来反应被测免疫成分的浓度或含量。

吖啶酯标记抗p24抗体与抗原的复合物示意图

吖啶酯标记抗体原理:

标记抗HIV-1p24抗体的吖啶酯选用含有琥珀酰亚胺(NHS 酯)基团的吖啶酯,这种吖啶酯中NHS基团通过一个空间二碳臂与吖啶酯母体相连形成吖啶酯-NHS ester。标记反应中,碱性条件时NHS酯标记基团被取代下来,吖啶酯通过羰基碳与被标记的抗HIV-1p24抗体的氨基结合,从而完成标记。

吖啶酯标记抗p24抗体步骤:

  1. 准备试剂:吖啶酯-NHS酯,超滤离心管、PBS缓冲液,Tris-HCl缓冲液、BSA、DMF、聚乙二醇PEG8000、赖氨酸、吐温20。
  2. 超滤离心管钝化处理、灭菌、清洗、离心。
  3. 将抗p24抗体加到离心管中离心、浓缩,收集样品,废液留下电泳看是否有抗体漏出;将标记缓冲液离心,反复两次,废液留下电泳看是否有抗体漏出;样品槽离心,加入标记缓冲液,离心。
  4. p24单克隆抗体溶于标记缓冲液,吖啶酯溶于DMF,吖啶酯与抗体以分子数5比1加入离心管,22度恒温震荡30分钟。
  5. 加入赖氨酸溶液,反应20分钟,终止标记反应。

实验中标记的吖啶酯采用的是NHS酯,德晟的6中吖啶酯中有4种含有NHS基团,可直接进行标记。

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