化学发光试剂吖啶酯标记抗HIV-1p24抗体
发布时间：
2021-05-12
化学发光试剂吖啶酯是化学发光免疫分析中常用的标记物，艾滋病病毒可通过抗原p24的来检测和诊断，实验中以抗原与抗体的特异性免疫反应为基础，以吖啶酯直接标记抗HIV-1p24抗体来检测。
吖啶酯CLIA检测原理：
吖啶酯作为化学发光免疫标记物与联酶免疫中的酶原理类似，只是标记物或指示物不一样，一个是通过发光检测一个是通过显色（比色）检测。吖啶酯的CLIA中用光来反应被测免疫成分的浓度或含量。
吖啶酯标记抗p24抗体与抗原的复合物示意图
吖啶酯标记抗体原理：
标记抗HIV-1p24抗体的吖啶酯选用含有琥珀酰亚胺（NHS 酯）基团的吖啶酯，这种吖啶酯中NHS基团通过一个空间二碳臂与吖啶酯母体相连形成吖啶酯-NHS ester。标记反应中，碱性条件时NHS酯标记基团被取代下来，吖啶酯通过羰基碳与被标记的抗HIV-1p24抗体的氨基结合，从而完成标记。
吖啶酯标记抗p24抗体步骤：
- 准备试剂：吖啶酯-NHS酯，超滤离心管、PBS缓冲液，Tris-HCl缓冲液、BSA、DMF、聚乙二醇PEG8000、赖氨酸、吐温20。
- 超滤离心管钝化处理、灭菌、清洗、离心。
- 将抗p24抗体加到离心管中离心、浓缩，收集样品，废液留下电泳看是否有抗体漏出；将标记缓冲液离心，反复两次，废液留下电泳看是否有抗体漏出；样品槽离心，加入标记缓冲液，离心。
- p24单克隆抗体溶于标记缓冲液，吖啶酯溶于DMF，吖啶酯与抗体以分子数5比1加入离心管，22度恒温震荡30分钟。
- 加入赖氨酸溶液，反应20分钟，终止标记反应。
实验中标记的吖啶酯采用的是NHS酯，德晟的6中吖啶酯中有4种含有NHS基团，可直接进行标记。
化学发光试剂,吖啶酯
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