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生物缓冲剂对生化检测有哪些影响

2021/05/29 17:05
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生物缓冲剂是生化检测中应用最普遍的辅助试剂,几乎所有液相反应体系的检测都需要用到缓冲剂。其主要作用是维持反应体系的pH值,常用的缓冲剂有磷酸盐、醋酸盐、铵盐,以及生化实验中的Tris、MOPS、HEPES等。

生物缓冲剂对生化检测的影响有很多,主要体现在溶液酸碱度(pH值)方面,具体的影响下面举例说明。

多种多样的生物缓冲剂

缓冲剂对酶活的影响:

大多数生化检测都是有酶参与的反应,酶的催化效率受pH值和温度的影响很大,每一种酶都有其最适pH值(酶催化反应效率最大时所处的pH值),因此有酶参与的生化检测需要首先根据所使用的酶制剂的最适pH值挑选合适缓冲范围的缓冲剂。比如Trinder’s试剂酶法检测、酶联免疫分析等。

缓冲剂对大分子结构的影响:

缓冲剂除了对酶的催化效率有影响之外,还可能影响酶的结构,如果体系的pH值和酶的适应pH值相差过大,可能会导致酶直接失活。另一方面,即使没有酶参与的反应,缓冲剂也是必要的,生化检测中往往涉及到许多大分子物质,其结构也受pH值影响。

比如吖啶酯化学发光检测,虽然吖啶酯与过氧化氢的反应不需要酶的催化可以直接发光,但CLIA分析中吖啶酯通常是标记的蛋白、抗原、抗体或者核酸,这些大分子物质结构复杂,受体系pH的值影响,因此同样需要生物缓冲剂。

缓冲剂对渗透压的影响:

很多缓冲剂还是有机弱酸弱碱共轭酸碱对,不同的缓冲剂其离子强度也不一样,对体系的盐浓度、渗透压有影响。细胞培养常用HEPES作缓冲剂,而不能使用影响细胞膜渗透压可能引起破裂的缓冲剂。

此外,不同的缓冲剂对不同金属离子的络合能力也不一样,如含钙、镁离子的体系用Tris缓冲剂而不用PBS,很多酶以及蛋白质的活性与金属离子浓度有关。德晟是生化缓冲剂老牌厂家,可供应十多种生物缓冲剂。

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Tris(三羟甲基氨基甲烷)是一种常见的生物缓冲液,可用于整个DNA提取过程。从多种来源提取过程中,DNA对pH敏感。在细胞裂解,去除不需要的细胞成分和沉淀过程中,可以使用tris来维持稳定的pH值。另外,它在细胞裂解中也起到特别重要的作用。
生物缓冲剂是电泳技术的重要组成部分,一般将其添加到溶液当中,以在电流通过样品时使pH稳定。此外,缓冲剂还能提供电泳迁移时所需的离子。
谷氨酸脱氢酶(简写GDH)是生物体代谢途径中一种重要的酶类。该酶广泛存在于各种高等植物、生物及动物体内,它在生物体内氮、碳代谢过程中起着至关重要的作用

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