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细胞裂解缓冲液的制备原理

2021/06/18 13:30
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科学家在从细胞中提取DNA或蛋白质进行分析时,特别是在细菌的情况下,使用裂解缓冲液。裂解缓冲液有助于破坏开放的细胞,因此可以改变其内容。一些实例包括盐,去污剂,螯合剂和抑制剂,以及一些碱性化学品。在下文中,将与大家一起探讨裂解缓冲液的制备原理?

1、裂解缓冲液在细胞分裂时,Tris-HCL缓冲液可稳定pH值。Tris-HCL是在pH 8时常见的缓冲化学品之一。HEPES是这些实验中的另一种常见缓冲化学品。氯化钠盐还可以提高离子强度,即细胞外部溶质的总浓度。

2、裂解缓冲液通常还包括螯合剂,例如乙二胺四乙酸(EDTA)或乙二醇四乙酸(EGTA)。这些化学物质与带有两个正电荷的金属离子结合,从而使它们无法用于其他反应。许多DNA酶(咀嚼DNA的蛋白质)和蛋白酶(分解其他蛋白质的蛋白质)需要镁离子才能发挥功能,因此EDTA和EGTA剥夺了它们的这种关键成分,有助于降低蛋白酶或DNAse活性的水平。但是,他们并不能完全排除某些蛋白酶不依赖镁辅助因子的情况,因此裂解缓冲液有时还包含称为蛋白酶抑制剂的化学物质,该化学物质与蛋白酶结合并阻止其正常运行。

3、碱性裂解是一种从细菌中纯化质粒的常用的技术,涉及三种溶液。第一个包含葡萄糖,tris-HCL缓冲液和EDTA。葡萄糖在细菌外部产生高的溶质浓度,因此它们变得有点松弛,使其更易于裂解。EDTA和tris-HCL的功能如前所述。第二种解决方案实际上是裂解细胞。这一种含有SDS去污剂和NaOH,可将pH值提高到12或更高,使细胞内的蛋白质变性并使DNA分离成单链。第三种溶液含有乙酸钾,可将pH恢复到一个更中性的水平,因此质粒DNA链可以重新聚集在一起。同时,变性的蛋白质会聚结并沉淀。

综上所述,大家对于裂解缓冲液的应用与分类应该也有所了解了,而对于裂解缓冲液其成分使用较多的还是Tris-HCL缓冲液,不过因为这款缓冲液的应用领域比较多,导致市场上的存货不多了,让采购者十分苦恼。在这里推荐一下我们公司,湖北新德晟材料有限公司,专业生产生物缓冲剂的厂家,公司成立已有十多年,拥有丰富的产品技术经验。生产效率高,产品质量优,发货速度快,售后有保障,可根据客户进行定制服务与测试服务,并提供专业的技术支持,无论如何,相信我司,一定是您购买生物缓冲剂的不二选择。

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Tris(三羟甲基氨基甲烷)是一种常见的生物缓冲液,可用于整个DNA提取过程。从多种来源提取过程中,DNA对pH敏感。在细胞裂解,去除不需要的细胞成分和沉淀过程中,可以使用tris来维持稳定的pH值。另外,它在细胞裂解中也起到特别重要的作用。
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