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影响猪源猪源胰蛋白酶提取的几个因素

2021/06/22 13:30
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猪源胰蛋白酶(EC3.4.21.4)是属于丝氨酸蛋白酶家族的消化酶。猪源胰蛋白酶在胰腺中合成并以非活性的酶原形式分泌到消化道中,在消化道中酶原通过除去部分肽链转变成活性酶形式。猪源胰蛋白酶在医药、轻工业及科学研究方面具有广泛的应用价值。据统计,猪源胰蛋白酶的年消耗量占酶制品世界市场的3%。

目前猪源胰蛋白酶普遍采用乙酸酸化水进行提取,硫酸铵分级盐析初步纯化。然后采用离子交换层析或亲和层析进行进一步纯化,可以得到较高收率的猪源胰蛋白酶,但对离子交换柱及亲和层析柱要求高、价格昂贵,具有一定的局限性。因此,寻求一种经济可行的猪源胰蛋白酶分离纯化方法已成为亟待解决。有实验采用Tris-HC缓冲液为提取剂,硫酸铵盐析和对猪猪源胰蛋白酶的提取及纯化工艺进行了研究,总结了影响猪源猪源胰蛋白酶在提取的几个因素。

  1. 料液比对猪源胰蛋白酶活力的影响由图1可知,Tris-HC浓度为0.05moVL。激活PH为8,当料液比在12~15时,随料液比的增大,猪源胰蛋白酶比活力逐渐增大,且在15时,猪源胰蛋白酶的比活力达到最大值;随着料液比的继续增大,猪源胰蛋白酶比活力逐渐降低。

  1. Tris-HC浓度对猪源胰蛋白酶活力的影响由图2可知,料液比为15,激活PH为8,当Tri-HC浓度在0.01~0.05mol/L时,随着浓度的增大,猪源胰蛋白酶比活力也逐渐增大,且在激活时间为0.05mol/L时,猪源胰蛋白酶的比活力达到最大值;随着浓度的继续增大,猪源胰蛋白酶比活力逐渐降低。

3.激活PH对猪源胰蛋白酶活力的影响由图3可知,料液比为15,Trs-HCL浓度为0.05mol/L,当激活PH在5~8时,随着激活PH的增大,猪源胰蛋白酶比活力逐渐增大,且在激活PH为8时,猪源胰蛋白酶的比活力达到最大值;随着PH的继续增大,猪源胰蛋白酶比活力逐渐降低。

根据实验结果,确定料液比、Tris-HCL浓度、激活PH、激活时间4个因素会影响猪源胰蛋白酶的提取,通过实验确定了最佳的工艺参数为∶料液比为15,Tris-HCL浓度为0.05moVL,激活PH为8,激活时间为6h,采用此种工艺条件,所制得的猪源胰蛋白酶比活力为 6600BAEE/mg猪源胰蛋白酶收率为 6.5%,该工艺简单,提取效率高,产品酶活高,

 

 

 

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