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蛋白酶K

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蛋白酶K

德晟科技立志成为优秀的特种酶产品与服务商,像蛋白酶K这样的高难度产品,要做到产品质量与产量都满足客户需求,目标就是为“新型冠状病毒”检测试剂盒的中国制造打上我们自主核心原料供应商的烙印
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蛋白酶 K简介

蛋白酶K是一种重要的丝氨酸蛋白酶,由林伯氏白色念球菌分泌。1974年,Wolfgang Ebeling等利用沉淀、离子交换层析和凝聚层析等方法在林伯氏白色念球菌的培养基中分离纯化出蛋白酶K。蛋白酶 K 属于枯草菌素家族。具有极高的酶活性和广泛的底物特异性,常被用于降解蛋白生产短肽。它具有丝氨酸蛋白酶类所特有的典型催化三联体 Asp39-His69-Ser224特征并且活性中心周围有两个Ca2+结合位点增加其稳定性,使其在更广泛的条件下保持较高的酶活力。

蛋白酶K的技术指标

外观:白色无定形冻干粉末

比活性:≥30 U/mg 蛋白

脱氧核糖核酸酶活性:未检测到脱氧核糖核酸酶活性

核糖核酸酶活性:未检测到核糖核酸酶活性

蛋白酶K的酶学性质

来源:林伯氏白色念球菌(Tritirachium album)

分类:EC 3.4.21.64

分子量:29 kDa (SDS-PAGE)

等电点:7.81

最适 pH:7.0-12.0 都具有较高活性

最适温度:65 ℃

pH 稳定性:pH 4.5-12.5 (25 ℃, 16 h)

热稳定性:50 ℃以下稳定(pH 8.0, 30min)

激活剂:SDS, 尿素

抑制剂:二异丙基氟磷酸(DFIP),苯甲磺酰氟(PMSF)

储存条件:干粉状态可在-20 ℃长期储存;溶解后应分装为适当体积,2-8 ℃短期储存,-20 ℃长期贮存

蛋白酶K的应用

1.在核酸提取检测中的应用:蛋白酶K可降解与核酸紧密结合的组蛋白,将DNA与蛋白质的分离,使得DNA更好的被提纯;而且蛋白酶K可降解RNA水解酶活性(Rnase),抑制Rnase水解模板RNA,在RNA的提取和检测过程中起到不可或缺的作用。

2.在原位杂交中的应用:蛋白酶K通常用来消化靶标DNA周围的蛋白质,以便于检测探针的穿透,提高检测的敏感性。需注意的是:蛋白酶K浓度过高或消化时间过长,都会破坏细胞结构,出现细胞核消失及脱片等现象,影响核酸的结合。

3.在非蛋白组分提取中的应用:蛋白酶K可降解蛋白质类杂质,更好的将目标组分和来自生物样本中的蛋白质进行分离,提高产物的纯度和生产效率,尤其可以降解内毒素等蛋白质类有害成分,提高产品安全性。

蛋白酶K的生产

德晟通过生物信息学分析、分子改造等技术手段成功筛选到一株具有较高有机溶剂耐受性的蛋白酶K突变体;构建了高产蛋白酶K的毕赤酵母工程菌株,优化工程菌发酵、酶纯化、产品后处理和冻干等工艺,提升蛋白酶K的生产效率,实现了蛋白酶K千克级生产,已成为国内优质的蛋白酶K生产商。通过酶定向改造技术与工艺优化,德晟科技蛋白酶K对于异硫氰酸胍溶液的耐受性明显提升。

德晟科技立志成为优秀的特种酶产品与服务商,像蛋白酶K这样的高难度产品,要做到产品质量与产量都满足客户需求,目标就是为“新型冠状病毒”检测试剂盒的中国制造打上我们自主核心原料供应商的烙印。德晟会继续努力,为提升中国体外诊断原料在全球供应链中的话语权而继续奋斗!

 

 

 

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