化学发光试剂吖啶酯DMAE-NHS的具体标记方法

发布时间:

2021-07-14


化学发光试剂如叫吖啶酯DMAE-NHS可以标记TSH单克隆抗体,检测甲状腺激素水平,还可用于肿瘤标志物甲胎蛋白的检测、免疫球蛋白和相关化合物等的分析,但是它的具体标记方法很少有人知道,今天德晟将会告诉大家比较合适的标记方法,吖啶酯DMAE-NHS的具体标记方法如下。

1. 计算所需的 NHS 酯量:

NHS_ester_weight [mg] = 8×amino_compound_weight [mg]×NHS_ester_molar_weight [Da] /amino_compound_molar_weight [Da]8是摩尔过量的NHS酯。它是单标记的实验值,适用于许多常见的蛋白质和肽。然而,在某些情况下,需要使用更少或更多的 NHS 酯。这取决于蛋白质结构、试剂、和溶解度。例如,用Cy5 NHS酯(摩尔量616道尔顿)标记3毫克BSA(摩尔量69300道尔顿),并获得峰值产量单标签产品,应使用8×3 mg ×616 Da / 69300 Da = 0.21 mgCy5染料NHS酯。

2. 确定反应混合物的体积。标记可以在从纳摩尔到几十克的任何规模上进行。当规模较低时,使用较小体积 (10-20 uL)。更高的浓度(每 1-10 毫克氨基生物分子)毫升混合物)是合适的。

3. NHS 酯溶解在 1/10 反应体积的 DMF DMSO 中。不含胺的DMF是优选的溶剂。反应过后,NHS 酯可以在 -20°C 的溶液中储存 1-2 个月。

4. 将生物分子溶解在 9/10 反应体积的 pH 8.3-8.5 缓冲液中。0.1 M 碳酸氢钠溶液具有合适的 pH 值。另一种选择是 0.1 M 磷酸盐缓冲液。注意 pH 值是很重要的事情。避免使用含有胺的缓冲液(有时可以使用 Tris,但不推荐使用)。在进行大规模标记(数百毫克 NHS 酯)时,请注意混合物会随着时间的推移而酸化由于NHS酯的水解。监测 pH 值,或使用更浓缩的缓冲液。

5. 在生物分子溶液中加入 NHS 酯溶液,并充分涡旋。在冰上过夜,或在室温下在至少 4 小时内。

6. 使用适当的方法纯化结合物:大分子的凝胶过滤是较普遍的。降水和色谱法是另一种选择。有机杂质(如 N-羟基琥珀酰亚胺、NHS 酯、产生的酸通过水解)几乎总是很容易分离。对于蛋白质和核酸,乙醇或丙酮沉淀可以使用。

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