细胞培养中的HEPES缓冲剂

发布时间:

2021-07-16


HEPES作为缓冲剂中的一员,很多地方都是有它的踪迹的。只是因为不了解所以往往让我们忽略了它的存在,也忘记了其实它本身在很多地方有着我们想象不到的作用。特别是在我们的细胞培养中更是有着不同凡响的优势。对于不了解细胞培养和HEPES缓冲剂的您来说,下面就可以很好了帮您解答为什么细胞培养离不开HEPES缓冲剂。

什么是细胞培养?

细胞培养本身就是细胞的克隆,它通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来,所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。但说到细胞培养我们就不得不提起HEPES这个有着两性离子的缓冲剂了。

为什么需要细胞培养?

这是由于培养中细胞的生长和代谢会导致培养基的环境pH值发生剧烈变化,因此,为了维持可以稳定培养细胞的环境,是有必要向其中添加适量的某些生物缓冲液。

为什么要使用HEPES缓冲剂?

大多数细胞的最佳培养环境是pH 7.2-pH 7.4 HEPES的缓冲范围恰好在pH 6.8-pH 8.2内,这对细胞培养是有利的。与其他缓冲液(例如PBS(磷酸盐缓冲盐水)和TRIS)相比,HEPES在维持细胞培养基的pH值方面具有更高的稳定性,这也是HEPES广泛用于细胞培养,组织培养,蛋白质纯化和提取,免疫沉淀,细胞裂解,活细胞成像和其他生物/生化研究的原因。

HEPES缓冲剂在细胞培养中需要注意什么?

1、在培养基中添加HEPES的主要起始步骤是将细胞环境维持在稳定的pH值中。这个非常重要,尤其是需要花费大量时间在培养箱外部的细胞上工作时,因为这会导致pH值变化。

2、需要特别注意,碳酸氢钠是用于稳定培养基pH值的另一种缓冲液。但是,不应该使用HEPES缓冲剂代替碳酸氢钠,这样的话培养基的酸性会比预期的更强。因为正常的碳酸氢盐缓冲液是CO2依耐性的,而HEPES缓冲剂也是CO2依耐性的。这也是为什么只将培养基放在室内空气中而不是放在培养箱中的原因,而培养基中的酚红会随着时间的推移而改变颜色。

3、在这里需要考虑一个问题,在细胞培养时是需要哪种类型的原代细胞?有些原代细胞非常易于培养,不需要对培养基进行大量补充,而其他一些原代细胞则非常挑剔,需要高度缓冲和补充的条件。

4HEPES缓冲剂在细胞培养基中的浓度推荐使用10mm-25mm,较高的浓度可能会导致在长时间的孵育过程中对细胞产生毒性。

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