吖啶酯化学发光反应条件优化

发布时间:

2021-07-30


吖啶酯化学发光试剂在碱性条件下,可以被过氧化氢氧化,产生化学发光现象,反应非常灵敏,反应迅速、发光强度大,由于是自身发光,不需要像荧光那样用光源照射,消除了背景干扰,它逐步成为主流的检测方法。本文介绍其化学发光反应条件的优化方法。

吖啶酯化学发光实验条件

介质与pH值对吖啶酯发光的影响

为吖啶酯提供碱性条件的介质很多,比如在碳酸钠、碳酸钠-碳酸氢钠、磷酸二氢钠-磷酸氢钠、磷酸氢钠、氢氧化钠、氢氧化钾等介质中吖啶酯都能与过氧化氢发生反应,产生较强的化学发光。吖啶酯在氢氧化钠介质中发光强度比其它介质中更大。实验中,外加0.05mL 0.05mol/L氢氧化钠溶液时,吖啶酯发光强度达到峰值;外加0.01~0.15mol/L氢氧化钠溶液时,发光强度变化较小。

吖啶酯溶液浓度及用量

吖啶酯溶液浓度为30-100μmol/L时,其发光信号差异比较小,添加的体积为50、100、150微升时,发光强度变化较小,取中位数100μL 浓度为50μmol/L的吖啶酯溶液较好。

添加组分的选择

测定化学发光强度时,通常采用静态注射法,先将几种反应组分混合均匀,然后在添加或注射最后一种组分,促使产生化学发光反应。分别将氢氧化钠、过氧化氢和吖啶酯作为注射试液,结果表明注射添加吖啶酯溶液时,发光强度更大。

酶反应液稳定性

有时氧化吖啶酯的过氧化氢由酶反应生成,经试验,酶反应完成后,溶液室温放置1小时内,过氧化氢浓度基本不变,因此吖啶酯发光强度几乎无变化;但放置1.5小时后,发光强度明显降低。

除上述几点外,反应体系中加入一定量的无极离子或有机物,吖啶酯检测结果会有影响,需要控制杂质离子的含量。德晟在化学发光试剂的研发合成上具有独特优势,可提供多种类型的吖啶酯试剂。