什么是DEPC处理的Tris缓冲液

发布时间:

2021-08-24


Tris缓冲液即用三羟甲基氨基甲烷Tris配制成的缓冲液,DEPC处理是指经过DEPC(二乙基焦碳酸酯)处理过的灭菌的Tris缓冲液,通常是用于RNA研究相关的实验中作为核酸的溶剂以及pH缓冲剂。

DEPC处理的Tris缓冲液

Tris缓冲液中DEPC作用

Tris缓冲液用于RNA相关实验时,对配制缓冲液所用的水要求较高,溶液中可能含有少量的RNA酶,会导致RNA的降解。而DEPC可灭活各种蛋白质,是一种强烈但不彻底的核酸酶(RNA酶)抑制剂,能够与很多酶的亚氨基、巯基、羟基等基团发生反应,破坏酶的结合位点使其失活。经DEPC处理的Tris缓冲液可以防止RNA被核酸酶降解。

Tris缓冲液中DEPC用量

一般来说,水溶液中含0.1%(体积分数)的DEPC即可使核酸酶Rnase失活,但在Tris缓冲液中的使用不一样。有人认为Tris缓冲液中不能加入DEPCTris属于一种胺类会加速DEPC的水解,不过这种说法不全对,可以将Tris缓冲液中的DEPC浓度增加至1%,这样DEPC即便水解也能与0.1%浓度的效果一样。

DEPC处理水配制Tris缓冲液

由于Tris缓冲液与DEPC有冲突,也可以先用DEPC处理水使其中的RNA酶灭活,然后再用处理过的水溶解干燥的Tris粉末来配制缓冲液。DEPC在水中缓慢溶解,开始以小液滴形式悬浮于溶液中,搅拌后逐渐溶解。DEPC自行分解成乙醇和二氧化碳很慢,采用高压灭菌处理的方法可以破坏DEPC,或者将溶液加热煮沸15分钟以上。

配制DEPC处理的Tris缓冲液时需注意,DEPC有潜在致癌风险,应尽量在通风条件下操作,避免接触皮肤。德晟在生物缓冲剂的研发生产方面经验丰富,可提供质优价廉的Tris粉末试剂。

三羟甲基氨基甲烷Tris,生物缓冲剂