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化学发光试剂吖啶酯的溶解与标记

发布时间：

2021-09-13

吖啶酯是化学发光免疫分析中所使用的一类化学发光试剂，这种分析技术常用于的检测项目有性激素、甲状腺激素、骨代谢、肿瘤标志物、免疫球蛋白等等，所以吖啶酯的相关研究和使用时非常热门的。

相比于电化学发光，目前国内以吖啶酯作为化学发光试剂的应用更加普遍，不需要非常昂贵的设备。吖啶酯化学发光检测主要具有灵敏度高、特异性强、试剂稳定性好且有效期长、检测线性范围宽、操作简单、方法稳定快速、检测项目多、自动化程度高等优点，逐步成为目前免疫分析技术的主流方法。

吖啶酯发光标记

吖啶酯的溶解方法

吖啶酯通常是以冻干粉的形式低温避光保存的，在使用时第一步就是将其配成溶液。吖啶酯在检测过程中通常是直接标记蛋白、抗体或核酸的，检测环境一般为水溶液，所以一些吖啶酯都会增加一些抗水解与亲水性的基团。那么是不是就是用水来溶解吖啶酯呢？

答案是否定的，吖啶酯的溶解与标记过程中依然要求是严格无水的，应该用非质子化的溶剂DMF（N,N-二甲基甲酰胺）或DMSO（二甲基亚砜）等来溶解。在标记之前，吖啶酯主体末端的羧酸与NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）相连从而活化，非常活泼，所以只能用非质子化的溶剂来溶解。吖啶酯用DMF较高溶解的浓度为4mM (约2.7mg/mL)，在DMSO中溶解度约为10mg/mL。

吖啶酯的标记基团

吖啶酯上通常使用NHS标记基团，可以直接与蛋白上的一级氨基相连接，同时脱去N-羟基琥珀酰亚胺。吖啶酯标记完成后，与被标记物之间以酰胺键或者酯键等形式存在，就可以稳定存在于弱酸性缓冲中了，含有抗水解性基团与亲水基团的还可以稳定于中性水溶液。吖啶酯本身活性位点在碱性和氧化环境下不稳定，偶联后用弱酸性的缓冲液，鼓氮气除去氧气。