体外受精(IVF)过程中常用的HEPES培养基介绍

发布时间:

2021-10-15


体外受精这项技术成功于20世纪50年代,在近20年发展迅速,现已日趋成熟而成为一项重要而常规的动物繁殖生物技术。HEPES,中文名羟4-乙基哌秦乙硫磺酸作为其中重要的培养基,主要作用是防止培养基pH迅速变动。在开放式培养条件下,观察细胞时培养基脱离了5%CO2的环境,CO2气体迅速逸出,pH迅速升高,若加了HEPES,此时可以维持 pH7.0左右一般在进行克隆化培养时要添加 HEPES

在动物体外辅助生殖技术中,从精液中筛选活力较强的健康精子,以用于进一步的体外受精(IVF)和宫腔内授精(IUI)治疗中。使用时,将精子清洗液(如碳酸氢盐或HEPES缓冲液)加入精子进样室及筛选后精子室以填充通道,然后将精子原液加入精子进样室,在37℃温育30分钟,活力较强的健康精子可通过微流控滤膜上的微孔进入筛选后精子室

体外受精过程需要从体内取出成熟的卵母细胞和精子,在离体条件下培养一段时间,然后进行人工授精,这些过程中由于脱离了母体的条件,需要用到各类的培养液模拟体内的生理环境,今天就来给大家介绍一下体外受精过程中常用的一些培养基:

卵母细胞的培养:

目前对牛卵母细胞体外成熟的研究主要集中在以TCM199为基础培养液,再添加激素,血清,卵泡液, 生长因子及颗粒细胞等成分来模拟卵母细胞体内成熟的环境以及各种成分间的相互作用以期达到与体内相当的成熟效果。常用的卵母细胞成熟培养液配方:基础培养液为TCM-199,添加10%FCS25mM Hepes0.55mg/ml丙酮酸钠及100IU青、链霉素;

精子细胞培养液配方推荐:

精子洗涤液:BO/TALP基础液+6mg/ml BSA(FractⅤ)+5mM咖啡因精子获能液:BO/TALP基础液+6mg/ml BSA(FractⅤ)+5mM咖啡因+60ug/ml肝素

注意事项:

HEPES和其他有机缓冲液可以有效调节培养基pH,适用于多种细胞系。实际上,某些标准培养基配方包含HEPES。但是,HEPES可能会有毒性,尤其是对某些已分化细胞,所以使用前需首先评估其效果。

体外受精技术对动物生殖机理研究、畜牧生产、医学和濒危动物保护等具有重要意义。。在家畜品种改良中,体外受精技术为胚胎生产提供了廉价而效率高的手段,HEPES作为培养基中不可或缺的物质,对充分利用优良品种资源,缩短家畜繁殖周期,加快品种改良速度等有重要价值

 

 

4-乙基哌秦乙硫磺酸,HEPES