生物缓冲剂Bicine能促进 Aβ40原纤维的聚集及形成

发布时间:

2021-11-05


淀粉样蛋白-β (Aβ) 的纤维状聚集体是脑淀粉样血管病中脑血管系统内衬斑块的主要成分。作为血管沉积物中主要的 Aβ同种型,Aβ40是脑淀粉样血管病研究中的一个有价值的目标。然而,Aβ40体外聚集的缓慢过程是寻找 Aβ 靶向分子的瓶颈。所以体外加速 Aβ40聚集的方法成为重中之重专家们使用各种体外方法评估了生物缓冲液bicine的聚集能力。数据表明,bicine促进 Aβ40的聚集具有高速和可重复性,产生具有显着富含 β-折叠的原纤维形成和毒性的聚集体混合物。

bicine 对 Aβ40肽的原纤维形成的浓度和时间依赖性影响首先通过 ThT 荧光测定进行了检查。ThT 与淀粉样蛋白 β-折叠结构的直接结合会导致荧光强度发生特征性变化 [9]。为了分析在增加缓冲液浓度下淀粉样原纤维形成的倾向,我们在 37°C下将单体Aβ40肽(50 μM)与系列浓度的 bicine(78.130 μM 至 20.000 mM)孵育 2 天。发现 Bicine 可在短时间内有效促进富含 β-折叠的原纤维的形成 (EC50= 837 nM)(1)。

荧光强度以浓度依赖性方式增加。由于 20 mM 是未显示细胞毒性的高浓度(S1 图),因此在以下实验中使用了20 mM 的二氯辛。随后,进行了时间依赖性 ThT 测定以检查双辛诱导的纤颤率(图 1B)。Aβ40单体在 bicine (20 mM) 或对照 PBS 溶液中于 37°C 孵育 2、4 和 7 天,并扫描 ThT 荧光强度。我们发现在 bicine 中孵育 2 天足以有效地形成显着更高水平的 Aβ40原纤维比在相同持续时间的 PBS 中孵育的那些。显示 Bicine 连续诱导纤维颤动 7 天,而在 PBS 溶液中未观察到纤维水平的显着增加。

 

1.Bicine 溶液中 Aβ(1-40) 聚集的纤颤动力学。

为了确认在 bicine 中孵育 2 天是否会产生足够的成熟原纤维,我们进行了远紫外 CD 和 TEM。结果发现,在 bicine (20 mM) 的存在下,Aβ40在孵育 2 天后显示出单个负带,最小值为 216 nm,这是明确定义的 β-折叠结构的典型 CD 光谱 [21]。此外,通过 TEM 在 Aβ 中观察到大量拉长的淀粉样原纤维40 个样品在 bicine 中孵育,而原纤维形成在 PBS 中较少。总体而言,这些结果表明,在 bicine 中孵育 2 天足以促进富含 β-折叠的 Aβ40原纤维的形成,在体外具有延长的形态。

 

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从结果可以看出,使用 bicine缓冲液的聚集条件可以快速获得具有毒性的富含β-折叠的 Aβ40聚集体,而且在本研究中获得 Aβ40原纤维期间没有观察到 bicine 的任何副作用,说了这么多你肯定会问,优质的bicine生产厂家哪里有呢,在这里推荐德晟生化,不仅可提供特殊的测试服务,例如生物负载,重金属以蛋白、酶活性测试等。此外,我们还提供多种包装选择,欢迎前来咨询订购!

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