CHES缓冲剂的配置方法及应用

发布时间:

2022-03-15


CHES缓冲剂,中文名称2-环己胺基乙磺酸是一种偶极离子(两性离子) Good's 缓冲液,在相对较高的 pH 值(高达 10)下使用。它用于包括酶学在内的多个生物学研究领域,还可研究高于生理 pH 范围的反应蛋白质稳定化、甘露聚糖酶活性测定、DNA 消化和 2'-脱氧腺苷 3'-单磷酸标记,并作为 Wilson 和 Horne 提取缓冲液的成分。另外在电泳实验中应用也很常见与大多数金属离子反应性低由此可见它在各种生化、分子生物学和分子诊断应用中的多用性。

CHES缓冲剂在25℃时PKA值为9.3左右,粉末水溶性好,15克的CHES粉末可溶解在85ml的水中,可使用氢氧化钠来调节PH值,因为它在水中是呈酸性的,所以需要用氢氧化钠来调节PH至8.6-10。

实验配置方法如下:

  1. 称取CHES 1.036 g (MW=207.3 g/mol),加入40 mL纯水;
  2. 40 mL CHES水溶液的pH值为4.50,测试温度为27℃;
  3. 加入1 mL 1 M NaOH溶液后,测试pH值为8.83;
  4. 加纯水定容至50 mL,转移到50 mL样品瓶中,室温下保存。

根据以上方法可配制出pH在9.0左右的CHES缓冲溶液母液,在实验的过程中,pH在8.83左右,但会有一点偏差,接近于9.0,符合实验要求。在配置时为了在实验过程中得到可靠的数据,实验细节很重要,所以在实验中需要的基础知识还需要认真地对待。

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