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CAPS缓冲剂在蛋白质转膜中的操作要点

发布时间：

2023-04-17

CAPS缓冲剂，作为一种在生化实验中非常常见的试剂，有时还会被应用到各种诊断试剂盒中，辅助操作人员进行检测。近段时间，德晟发现网上不断出现其用于蛋白质转膜的相关信息，有很多实验人员也不清楚它主要的操作要点，所以下面就围绕这方面给大家详细介绍一下。

一、蛋白转膜实验中CAPS的配制

1、一般在实验中会根据10xCAPS(100mmol/L)的缓冲液配制，准备22.13g的CAPS粉末，然后加去离子水到900ml溶解，再加入2mol/L 的氢氧化钠，将pH值调到11.0，然后定容到1L，贮存在4度的条件下即可。

2、如果是需要CAPS电印迹缓冲液，根据10xCAPS 200ml，其配制方法为加入200ml甲醇和1600ml去离子水即可得到。

二、实验中使用CAPS操作要点

按照常规条件进行，CAPS应用于≥20KD蛋白中。
确保甲醇浓度，其范围应在0-20%之间，甲醇浓度的高低对分子量蛋白转印的高低不同，如低浓度适合高分子量蛋白转印。
浓度调整完成后，取出PVDF膜，将其放进甲醇中浸湿，然后放入CAPS电泳缓冲液中，注意此操作应防止膜变干，否则不利于实验。
取出电泳凝胶，将其放入CAPS缓冲液中浸泡5-10分钟，如果是转移部分强碱性蛋白，可忽视这点操作要求。
将滤纸和海绵放入电泳缓冲液红浸泡，然后依次将海绵、滤纸以及PVDF膜、凝胶等放入电印迹夹层中装好进行转印。注意转印要求为在50V恒压条件下于室温中转印即可，时间在2小时左右。
如果要对取出的蛋白膜进行上色，可以使用去离子水轻轻漂洗，然后用甲醇泡三秒，再进行处理晾干即可。