PIPES缓冲液和HEPES缓冲液选哪个好

发布时间:

2024-07-07


在生物化学和分子生物学实验中,缓冲液有多种。它们能够稳定溶液的pH值,确保实验环境的稳定性,从而保证实验结果。一般常见的缓冲液中,PIPES和HEPES是两种非常重要的缓冲剂。尽管它们在某些方面具有相似的功能,但却都有着各自的特点和优势。下面将和大家来详细比较一下PIPES和HEPES缓冲液的性能及应用,帮助您在实验中做出理想选择。

 

(PIPES桶装)

 

一、PIPES缓冲液

1、PIPES性能特点:

(1)pH缓冲范围::6.1-7.5

(2)溶解性:不溶于水,溶于NaOH水溶液

(3)金属离子相容性:不与多数金属离子形成稳定配合物,适合含有金属离子的溶液体系

(4)自由基形成:PIPES能形成自由基,因此不适合应用于氧化还原体系。

 

2、PIPES应用领域:

(1)磷酸纤维素色谱:用于纯化微管蛋白。

(2)凝胶过滤法:用于纯化重组GTP结合蛋白ARF1和ARF2。

(3)大肠杆菌结晶转酮酶:作为缓冲液使用。

(4)阳离子交换色谱法:适用于低浓度使用,因为PIPES的离子强度较大,且pKa值具有浓度依赖性。

 

由于PIPES能形成自由基,不适合用于氧化还原体系。同时,在阳离子交换色谱法中应使用低浓度的PIPES缓冲液,以避免高离子强度的影响。

 

二、HEPES缓冲液

1、HEPES性能特点:

(1)pH缓冲范围:6.8-8.2

(2)溶解性:溶于水

(3)金属离子相容性:不与金属离子形成稳定的配合物,通常不会干扰生物化学过程

(4)使用浓度:终浓度为10-50 mmol/L,一般培养液内含20 mmol/L HEPES即可达到缓冲能力

 

2、HEPES应用领域

(1)细胞培养基:常用于各种类型生物体的细胞培养基中。

(2)蛋白质研究:用于阳离子交换色谱法中的结合缓冲液和洗脱液。

(3)RNA研究:用于分离与分析RNA核组分的反应缓冲液、预杂交缓冲液、杂交缓冲液,以及RNA与T4RNA连接酶的3′-终端标记。

(4)诊断试剂盒:用在生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒及PCR诊断试剂盒中。

 

HEPES对DNA和限制酶之间的反应有干扰,也不适合用于Lowry氏法测定蛋白质含量。因此,在这些应用中应避免使用HEPES。

 

三、PIPES和HEPES的比较

1、溶解性:PIPES不溶于水,需要溶于NaOH水溶液。而HEPES具有良好的水溶性,这使得HEPES在需要水溶液环境的实验中更加便捷。2、缓冲范围:PIPES的pH缓冲范围为6.1-7.5,偏向酸性到中性;而HEPES的pH缓冲范围为6.8-8.2,偏向中性到碱性。选择缓冲液时应根据实验所需的pH范围进行选择。

 

3、金属离子相容性:两者都不与金属离子形成稳定配合物,适合含有金属离子的溶液体系。但PIPES在形成自由基的情况下,不适合用于氧化还原体系,而HEPES在大多数情况下不会干扰生物化学过程。

 

4、应用区别:PIPES适用于需要在较低pH范围内进行的实验,如微管蛋白的纯化、大肠杆菌结晶转酮酶的结晶等。HEPES更适用于细胞培养、RNA研究、诊断试剂盒的应用,尤其是在需要水溶性缓冲液的情况下。

 

四、如何选择PIPES和HEPES缓冲液

1、pH范围:根据实验要求的pH范围选择适合的缓冲液。

2、溶解性:如果实验需要在水溶液中进行,优先选择HEPES。

3、金属离子相容性:如果实验体系中含有金属离子,选择不与金属离子形成配合物的缓冲液。

4、实验类型:根据具体实验的要求选择合适的缓冲液。例如,在需要长时间稳定pH的细胞培养中,选择HEPES更为合适;而在需要避免自由基形成的实验中,避免使用PIPES。

PIPES,HEPES