CHES缓冲液的配置及溶液ph值测定
发布时间：
2025-08-09
在生物化学和分子生物学实验中，准确控制反应体系的pH值有利于实验结果的准确。CHES缓冲剂作为一种在较高pH值范围发挥作用的两性离子Good's缓冲液，应用颇为广泛。其配置及溶液pH值测定是一项需要严谨操作和准确测量的工作。
（CHES缓冲剂500g瓶装）
一、CHES缓冲剂的特性
CHES，中文名称为2 - 环己胺基乙磺酸，属于两性离子化合物，适用于相对较高pH值（高达10）的实验环境。在水中，CHES呈现酸性，这一特性决定了在配置缓冲液时，需要碱性物质来调节pH值，以满足实验所需的pH范围。在25℃时，CHES的PKA值约为9.3。PKA值是衡量缓冲剂缓冲能力的重要指标，它决定了缓冲剂发挥缓冲效果的pH范围。CHES在其PKA值附近的pH区间内，能够抵抗外加酸碱的影响，维持溶液pH值的稳定。一般来说，CHES缓冲液的适用pH范围在8.6 - 10之间，这使得它在许多需要碱性环境的生物化学反应中不可或缺。例如，在某些酶促反应中，特定的酶需要在碱性条件下才能保持活性，CHES缓冲液就能提供这样适宜的环境。
二、CHES缓冲液的配置步骤
1.试剂准备：准备好所需的试剂和仪器，包括CHES粉末、氢氧化钠溶液（1M）、纯水、电子天平、量筒、pH计、容量瓶、样品瓶等。
2.称取CHES：根据实验需求，称取CHES 1.036 g。由于CHES的摩尔质量为MW = 207.3 g/mol，称取的这一质量能够配置出特定浓度的缓冲液。在称量过程中，要注意电子天平的使用规范，确保称量结果的准确性。将称取好的CHES粉末小心地倒入干净的容器中，加入纯水。
3.溶解CHES：向装有CHES粉末的容器中加入40 mL纯水。在加入纯水的过程中，可以使用玻璃棒轻轻搅拌，加速CHES的溶解。此时得到的是40 mL CHES水溶液，这是配置缓冲液的初始溶液。
4.调节pH值：使用pH计测量40 mL CHES水溶液的pH值，由于CHES在水中呈酸性，而我们需要的缓冲液pH值范围在8.6 - 10之间，所以需要加入碱性的氢氧化钠溶液来调节pH值。缓慢加入1 mL 1 M NaOH溶液，边加边搅拌，使溶液充分混合。加入氢氧化钠溶液后，再次使用pH计测试溶液的pH值，在调节pH值的过程中，要注意pH计的正确使用方法。
5.定容与保存：将调节好pH值的溶液转移至50 mL容量瓶中，用纯水定容至刻度线。定容时要注意视线与容量瓶刻度线平齐，定容完成后，将溶液转移到50 mL样品瓶中，盖好瓶盖，在室温下保存。在保存过程中，要注意避免溶液受到污染和光照。
三、溶液pH值测定的要点
1.pH计的校准：在使用pH计测量CHES缓冲液的pH值之前，需要对pH计进行校准。按照pH计的操作说明书，将电极依次放入不同pH值的标准缓冲溶液中，进行校准操作。校准完成后，pH计才能准确测量未知溶液的pH值。在校准过程中，要注意标准缓冲溶液的温度与实际测量温度相同，以减小误差。
2.测量温度的影响：溶液的pH值会受到温度的影响，因此在测量CHES缓冲液的pH值时，要记录测量温度。在实验过程中，要尽量保持测量温度的恒定。如果测量温度与标准温度不同，可能需要对测量结果进行温度校正。
3.测量操作规范：在测量pH值时，要将pH计的电极缓慢插入溶液中，确保电极浸没在溶液中，但不要接触容器底部或侧壁。轻轻搅拌溶液，使溶液中的离子分布均匀，然后等待pH计读数稳定。读数稳定后，记录下pH值。在测量完成后，要及时将电极从溶液中取出，用纯水冲洗干净，并用滤纸轻轻吸干电极表面的水分，以备下次使用。
（CHES粉末）
湖北新德晟作为生物缓冲剂研发生产厂家，在业内树立了口碑。凭借专业的研发团队与工艺，产出的CHES缓冲剂品质上乘，纯度高、稳定性强。如果您有采购意向，欢迎随时点击网站咨询！
CHES,生物缓冲剂
