新闻中心

全部分类

首页

Tris缓冲液和HEPES缓冲液的区别

发布时间：

2020-05-30

在很多的生化实验中，需要用到生物缓冲剂，它的作用主要是能够抵制外界少量强酸和强碱的影响，给反应体系提供一个合适的pH值。我们常用的缓冲液有Tris缓冲液和HEPES缓冲液，很多人常常分不清楚二者的区别，这里德晟公司将给大家做一个介绍：

生物缓冲剂系列

简介及应用：

Tris缓冲液：三羟甲基氨基甲烷（Tris）为弱碱性，在25°C下pKa为8.1，其缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0~9.2之间，在生物化学实验中常用的pH值为6.8、7.4、8.0、8.8。常在电泳和凝胶实验中起缓冲作用，并被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂，还可用于线虫的中间纤维的形成。其衍生的TE、TAE、TBE等缓冲液，常用于DNA的稳定、存储以及提取。

HEPES（4-羟乙基哌嗪乙磺酸）：是一种两性离子生物缓冲剂，属于Good’s缓冲液，有效缓冲范围6.8~8.2，可广泛应用于多种生物化学反应，并在某些细胞培养基中用作缓冲试剂。其使用终浓度为10~50mmol/L，一般培养液内含20mmol/L即可达到缓冲能力。此外，由于无细胞毒性，HEPES缓冲液常用于细胞器和极易变性的、对pH敏感的蛋白质和酶的研究工作，以及生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。

两种生物缓冲液的特征

Tris缓冲溶液：

1、本身呈碱性，只用Tris-HCl缓冲体系即可配制pH范围由酸性到碱性的缓冲液，并且可以与其他物质组成多种缓冲体系，如TE、TBS、TAE、TBE等衍生缓冲液；

2、对生物化学过程干扰很小，不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀；

3、受溶液浓度影响大，稀释十倍，pH值变化大于0.1；

4、受环境影响较大，一般来说，温度每升高一度，pH值下降0.03；

5、易吸收空气中的CO₂。

HEPES缓冲液：

1、pKa值介于6.0和8.0之间；

2、在水中具有高溶解度；

3、具有膜不透性，不易穿透生物膜；

4、对生化反应影响有限，可耐化学作用和酶解作用，且不与金属离子生成复合物或沉淀；

5、有极低的可见光和紫外光吸收；

6、离子浓度、溶液组成和温度对解离的影响小；

缓冲液配制方法

1、Tris-HCl缓冲液的配制有两种方法：

①分别配制0.05mol/L Tris和0.05mol/L HCl溶液，然后按常用表中所列体积混合即可。由于标准浓度的稀盐酸不易配制，所以常用第二种方法；
②以配置1L 0.1mol/L的Tris-HCl缓冲液为例：称12.11g Tris碱溶于950mL～970mL去离子水中，边搅拌边滴加4N HCl，用pH计测定溶液pH值至所需的pH值，然后再加水补足到1L。

2、 HEPES缓冲溶液的配制，根据用途，一种是单纯的HEPES＋NaOH，另一种是HEPES＋盐：

HEPES＋NaOH （500mL）：119.15g HEPES溶解在400mL蒸馏水中，加0.5~1M的NaOH水溶液调节至少所需pH，然后用蒸馏水定容至500mL；
HEPES＋盐（500mL）：HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na₂HPO₄·7H₂O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值，定容至500mL。

德晟公司生产的Tris和HEPES缓冲剂，其在缓冲范围、实验温度、以及特征和配制方法上都有一定的差别，在具体实验中，需要对实验条件进行仔细分析，以选择合适的缓冲体系。另外，需要注意的是，在离子交换层析时，如用阳离子交换柱，要避免使用带正电的Tris缓冲液，而HEPES属于两性离子缓冲液，阴阳两种离子交换层析都适用。

生物缓冲液,Tris,Tris缓冲液厂家

相关新闻

CHAPS是一种低细胞毒性的两性离子去垢剂，可有效减少FGF、EGF等生长因子在低浓度下因容器表面吸附造成的损失。0.1% CHAPS能显著提高储存和色谱纯化中的回收率，且不影响细胞生长与氨基酸分析，并可经反相HPLC去除。相比SDS、NP-40等，CHAPS在蛋白保护与细胞友好性之间更具综合优势，是生长因子纯化与储存中的实用稳定剂。生长因子稳定性的现实挑战生长因子在组织、细胞或培养基中的含量通常很低，纯化过程中的回收率可能出乎意料地低。更关键的是，生长因子在皮摩尔至纳摩尔浓度水平即可发挥生物学效应，而稀释后的高纯度生长因子容易因不可逆吸附于实验容器和色谱载体的表面而损失。传统的应对思路是加入载体蛋白（如BSA）来减少吸附，但这会引入额外的蛋白污染，给后续纯化和分析带来麻烦。寻找一种既能抑制吸附、又对细胞无明显毒性的添加剂，成为生长因子研究中的一个实际需求。 CHAPS的低细胞毒性特点在一项较早的研究中，研究者对比了多种去垢剂对培养哺乳动物细胞的毒性。结果显示，两性离子去垢剂CHAPS在所测试的去垢剂中表现出较低的细胞毒性。这一特性对于生长因子的处理尤为重要。生长因子最终往往需要用于细胞培养实验，如果稳定剂本身对细胞有明显毒性，就会干扰对生长因子活性的评估。CHAPS的低毒性使其能够在稳定蛋白的同时，不引入额外的生物学干扰。具体数据显示，在浓度低于0.01%时，CHAPS不影响小牛血清的生长因子活性和BALB/c 3T3细胞的生长速率；大鼠前列腺上皮原代培养和NRK-49F细胞集落形成在CHAPS低于0.003%时也几乎不受影响。稳定作用的具体表现 CHAPS对生长因子的稳定作用体现在多个层面。首先，它能够有效防止生长因子因吸附于储存容器表面而造成的损失。研究表明，加入0.1%的CHAPS可以显著减少FGFs在储存和透析过程中的损失，提高回收率。其次，CHAPS还能改善色谱纯化过程中的活性回收和洗脱曲线。在FGFs的纯化中，CHAPS的加入使得粗品和纯化后的生长因子在色谱步骤中的表现更为理想。另一个值得注意的细节是，CHAPS不会干扰氨基酸组成分析（在浓度低于0.1%时），对氨基酸序列分析的影响也很小（直至0.5%）。这意味着在需要验证生长因子身份时，CHAPS的残留不会成为分析障碍。此外，CHAPS可以通过反相高效液相色谱去除，便于在最终制剂中控制其残留量。与其他去垢剂的对比在FGFs的稳定实验中，研究者考察了多种去垢剂，包括SDS、NP-40、NOG等。CHAPS在低细胞毒性和稳定效果的综合表现上具有优势，能够兼顾对蛋白的保护和对细胞的友好性。 CHAPS包装小结 CHAPS在生长因子处理中的角色，可以理解为一种温和的守护者：它通过抑制蛋白吸附来减少损失，通过低细胞毒性来避免干扰生物学实验，通过可去除性来保持下游分析的灵活性。对于从事生长因子纯化和细胞实验的研究者而言，理解CHAPS的这一应用场景，有助于在蛋白稳定策略中做出更合适的选择。湖北新德晟可提供包括CHAPS在内的多种去垢剂产品，适用于生长因子纯化及蛋白稳定等实验场景。如需了解更多产品信息，欢迎联系湖北新德晟。请给以上内容写一个100字左右的概要 CHAPS是一种两性离子去垢剂，在生长因子纯化与储存中可作为低毒性稳定剂使用。它能有效抑制FGF、EGF等生长因子因吸附容器表面而造成的损失，同时不干扰细胞实验和氨基酸分析。本文梳理了CHAPS的低细胞毒性特点、稳定作用机制及与其他去垢剂的对比，为蛋白稳定策略提供参考。