新型 Trinder’s 试剂DAOS的使用方法

发布时间:

2020-06-01


应用:过氧化氢检测,比色法

特点:作为新型Trinder’s 试剂的一员,DAOS与其它显色底物相比,拥有高水溶性 ,是一种稳定的苯胺类似物 ,生色过程和氧化反应的pH范围很广 ,被广泛用于诊断检验和生化试验。在比色法测定过氧化氢活性中比常规生色的试剂具有若干优势。新型Trinders 试剂足够稳定,既可以用于溶液也可以用于试验流水线检验系统中。

比色法测定过氧化氢含量

测试原理:在过氧化氢和过氧化物酶的存在下,新型 Trinder’s 试剂在与 4-氨基安替比林(4-AA)或 3-甲基苯并噻唑砜腙(MBTH)的氧化偶合反应过程中,形成稳定的紫色或蓝色染料。与MBTH偶合染料的摩尔吸光度比与4-AA偶合染料的高 1.5-2 倍。底物被其氧化酶酶促氧化产生过氧化氢。该过氧化氢的浓度对应于底物浓度。因此,可通过氧化偶合反应的显色测定底物的量。对于特定的底物,试验不同种类的新型 Trinder’s 试剂对开发合适的检验系统是必需的。

检验溶液的制备——DAOS(其他底物配置方法基本一致) :

1. 用 10 ml PBS缓冲液溶解 23mg DAOS以制备6.6 mM DAOS 溶液。(具体溶度根据需要调节)

2. 用 10 ml PBS缓冲液溶解 14mg 4-氨基安替比林(4-AA)以制备 6.6 mM 4-AA 溶液。

3. 用 PBS 制备 2 U/ml 辣根过氧化物酶溶液。

4. 将等体积的各溶液混合以制备检测溶液4℃下避光储存检验溶液。

检验步骤: 

1. 为酶促氧化反应制备样品溶液。缓冲液的 pH 值范围应为 5.5-9.5。

2. 使用相同缓冲液制备含有已知量的底物的标准溶液。

3. 向样品溶液中加入合适单位的氧化酶,接着加入等体积的检验溶液。

4. 室温或 37℃下孵育该混合物 30 分钟到 1 小时。

5. 测定 593 nm 处的 O.D.值。

6. 制备标准曲线,并测定样品溶液中的底物浓度。

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