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HEPES裂解缓冲液应用于细胞核质蛋白提取CAS7365-45-9

发布时间：

2020-07-17

HEPES 即4-羟乙基哌嗪乙磺酸（N’-a-hydroxythylpiperazine-N’-ethanesulfanic acid ），一种白色晶体粉末，氢离子缓冲剂，可以较长时间控制恒定的pH 范围。有效缓冲范围为pH6.8-8.2。常用于配制蛋白提取裂解缓冲液、细胞培养用缓冲液等。

HEPES 的解离常数是 7.5，HEPES 与其 Na-HEPES 等摩尔混合时，溶液PH是7.5，一般都是先配好固定摩尔浓度的HEPES，然后用强碱（一般常用NaOH）调节pH到指定值，这里NaOH只是起到了提供OH的作用，用其他强碱如KOH也是可以的，pH差别大时,用浓NaOH，微调时，用稀NaOH，若直接加NaOH固体，误差太大，而且NaOH溶解时放热，改变了温度后可能会影响pH电极准确性。

HEPES裂解缓冲液配制：

裂解液A：		裂解液B：
HEPES	10mmol/L，pH7.9	HEPES	20mmol/L，pH7.9
KCl	10mmol/L	NaCl	420mmol/L
MgCl2	1.5mmol/L	MgCl2	1.5mmol/L
DTT	1mmol/L	DTT	0.5mmol/L
甘油	5%	甘油	25%
EDTA	0.2mmol/L	EDTA	0.2mmol/L
NP-40	1%
PMSF （使用前加入）	1mmol/L	PMSF （使用前加入）	0.5mmol/L
aprotinin	3mg/L	aprotinin	5mg/L
leupeptin	3mg/L	leupeptin	5mg/L
pepstainA	2mg/L	pepstainA	3mg/L

操作步骤：
1.将细胞收集到EP管中，离心（4000r/min，5min，4度)。
2.用PBS洗三次，离心同上，弃上清。
3.加入100微升缓冲液A，冰上孵育10min，离心（14000r/min，1min），弃上清。
4.将沉淀重悬于60微升缓冲液B中，混匀，冰上30min，离心（14000r/min，15min，0度),收集上清，弃沉淀。

其中，裂解液A的作用主要用于释放胞浆蛋白和膜蛋白，裂解液B用于释放核蛋白，NP-40既是一种表面活性剂又是一种去垢剂，它的作用是既可破坏细胞膜（较温和），又可结合释出的蛋白防止沉淀，所以通过首步离心去上清后大部分胞浆蛋白和膜蛋白可去掉。核蛋白提取后可用裂解液A透析2h，合并用于IP；或用其他溶液稀释后用浓缩离心管替换溶液后用于IP或其他实验。

德晟公司的体外诊断试剂原料主要有：1、生物缓冲剂Tris、BICINE、HEPES、CAPS、MOPS、TAPS、EPPS、MOPSO、PIPES、PEP;2、化学发光试剂鲁米诺、异鲁米诺、吖啶酯DMAE-NHS、吖啶酯NSP-DMAE-NHS、吖啶盐NSP-SA、吖啶盐NSP-SA-NHS、吖啶酰肼NSP-SA-ADH、吖啶酯ME-DMAE-NHS；3、新型Trinder’s试剂TOOS、TOPS、ADOS、ADPS、ALPS、DAOS、HDAOS、MADB、MAOS；4、采血管添加剂抗辐照分离胶、肝素钠、肝素锂、EDTA-2K3K、EDTA-2NA、促凝剂、促凝粉等，此外还生产病毒保存液和卡波姆940/980,欢迎各位朋友前来选购。