手把手带你制备色原底物TOOS溶液—超全攻略
发布时间：
2023-08-22
色原底物在生化研究中扮演着关键的角色，其可以与酶催化产生可测量的信号，从而揭示反应过程。TOOS就是这样一种在生化实验中广泛应用的色原底物，它足够稳定，既可以用于溶液也可以用于试验流水线检测系统中，同时也能用于试剂盒中，实现临床要求。市场上大多是粉末状的TOOS，它该如何制备和进行检测呢？
一、色原底物TOOS溶液的制备
1、用10 ml PBS（磷酸盐缓冲液）溶解20 mg TOOS，以制备6.6 mM的TOOS溶液。需要根据实验需要进行溶解度的调节，以获得所需浓度。
2、用10 ml PBS溶解14 mg 4-氨基安替比林（4-AA），制备6.6 mM的4-AA溶液。
3、制备2 U/ml的辣根过氧化物酶溶液，使用PBS作为溶液基质。
4、将上述各种溶液按等体积混合，以制备检测溶液。制备好的检测溶液需在4℃避光条件下储存。
二、色原底物TOOS的检测步骤
（1）为酶促氧化反应制备样品溶液，确保缓冲液的pH值范围在5.5-9.5之间，以保证酶的较佳活性。
（2）使用相同缓冲液制备含有已知底物浓度的标准溶液，用于制备标准曲线。
（3）将样品溶液中加入适量的氧化酶，然后加入等体积事先制备好的检测溶液。
（4）将混合物在室温或37℃下孵育30分钟到1小时，以确保酶催化反应充分进行。
（5）在反应结束后，测定555 nm处的光密度（O.D.值），此时的O.D.值可以反映出酶催化产物的形成情况。
（6）利用制备的标准溶液制作标准曲线，并据此测定样品溶液中底物浓度。
三、注意事项
在制备检测溶液时，要严格按照实验要求的比例进行混合，以确保反应的准确性。在储存检测溶液时，务必在4℃下避光，以防止色原底物的分解。
色原底物TOOS的制备及检测步骤相对简单，但在生化实验中扮演着重要角色。通过合理的操作流程，我们可以获得可靠的实验结果，为生化研究提供有力支持。德晟作为色原底物的专业生产厂家，它可以供应种类多，稳定性强的原料底物，包含TOOS、TOPS、ADOS、ADPS、ALPS、DAOS、HDAOS、MADB、MAOS等，如果您有意向，欢迎前来选购！
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