缓冲液Bicine、Tris、MOPS在蛋白质转膜实验中的应用
发布时间：
2020-12-25
双羟乙基甘氨酸Bicine、三羟甲基甲胺Tris、吗啉丙磺酸MOPS都是生物学常用的缓冲剂，主要用于蛋白质、核酸相关的研究实验。有些实验中不只是用单独某种缓冲剂，而是几种配合使用。
在蛋白质的聚丙烯酰胺转膜实验中，上样缓冲液使用Tris缓冲液，电泳缓冲液使用Tris-MOPS-SDS体系，而转印缓冲液则使用Tris-Bicine体系，能分离分子量在205-45KDa的蛋白质，电泳速度快约40分钟完成，转膜效率高30分钟完成全部蛋白质转移。
德晟Bicine、Tris、MOPS原料厂家供应
5X Sample Buffer（5倍工作浓度上样缓冲液）：
SDS 1.0 g，甘油Glycerol 5.0 ml，溴酚蓝 25 mg，三羟甲基氨基甲烷Tris base 150 mg（调节pH值至6.8），2-巯基乙醇 1.0 ml，去离子水10 mL。
电泳缓冲液10X Running Buffer：
Tris base 60.6g，吗啉丙磺酸MOPS 104.6g，EDTA3.0g，SDS 10.0 g，去离子水1升。
转印缓冲液 20X Transfer Buffer：
Tris base 60g，双羟乙基甘氨酸Bicine 81.6g，去离子水1升。
电泳槽中电泳时，现将电泳凝胶放入槽中，倒入充足的1X电泳缓冲液，使得缓冲液覆盖上样胶孔5-7mm。外槽倒入充足1X电泳缓冲液以确保电泳时的冷却效果，外槽的缓冲液液面接近上样孔的底部为最佳。用移液枪或注射器，冲洗胶孔以去除气泡和存在于胶孔中的缓冲液。每孔蛋白质最大上样量50ug（样品在1X样品缓冲液100℃条件下孵浴5分钟），最佳的上样量必须通过实验得出，上样过量将会导致涂抹带或者条带失真。样品中含有过量的游离碳水化合物也会导致条带失真。电泳140V 30-45分钟，具体时间视目的蛋白质的大小而定。
电泳结束后，按设备说明取出电泳凝胶，进行染色或者转膜实验。取20X转印缓冲液50mL，用100mL甲醇或乙醇外加850毫升去离子水，即可配制成1X转印缓冲液。湿法转膜条件40V，90分钟；或者半干方法转膜条件25V，30分钟完成。
在蛋白质的凝胶电泳转膜实验中，用到了Bicine、Tris、MOPS三种生物缓冲剂，本实验需要一定的操作经验，新手可以多作尝试。德晟除了缓冲溶液外还有多种缓冲剂原料，可以自己根据需要配置成不同的缓冲体系，对实验来说更经济和灵活。
双羟乙基甘氨酸,Bicine
