Trinder's试剂等酶的不同底物的检测波长代表的含义

发布时间:

2022-02-01


在生化诊断中,酶联免疫分析所使用的底物是测定待测指标的关键因素,往往决定了检测的准确性和灵敏度。Trinder's试剂NADPPNPG等底物反应生成有色产物后,通过检测产物最大吸收波长处的光吸收即可达到测定的目的。

对于不同的底物,其显色产物的最大吸收波长是不同的,如果待测样本比较复杂,其中某种成分与检测的波长相近的话,就比较容易造成干扰,这需要对底物反应后的最大吸收波长有所了解。

 

Trinder's试剂等酶的不同底物的检测波长

不同底物的检测波长:

  1. NADHNADPH340nm有特征性吸收峰,而NAD+NADP+340nm有特征性吸收峰,而NAD+NADP+340nm无特征性吸收峰,利用其偶联的脱氢酶(工具酶)反应,根据340nm吸光度的变化,可以测定物质的浓度或活性。对应的酶有谷氨酸脱氢酶、乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、葡萄糖脱氢酶、类固醇脱氢酶等。
  2. Trinder's试剂在过氧化物酶的作用下可与4-AAMBTH耦联生成有色产物,产物的最大吸收波长及设置的检测波长比较高,像ADPSADOSTOOSALPS540-560nmDAOSHDAOS则为590nm左右,比较高的是MAOSMADB,达到了630nmELISA试剂盒中常用的TMB450nm,比Trinder's试剂要低许多。
  3. 其它的色原如p-NP磷酸对硝基苯酚、p-NA对硝基苯酚也有应用在丙氨酸转氨酶、酸性磷酸酶的检测中,p-NA405nm有特征性吸收峰。

需注意的是这里的检测波长都是底物或者反应后产物的吸收波长,与试剂或溶液的颜色不是一致,而是互补的关系。比如MAOS产物吸收波长630nm处于橙色或红黄色光波段,其溶液则是显蓝绿色的,ADPS产物吸收波长540nm处于绿色波段,其溶液则是呈紫红色。

另外,酶的底物除了有显色底物外还有近来热门的发光底物,比如鲁米诺、异鲁米诺,不同的是,鲁米诺是本身发光,检测波长是发射光的波长,而Trinders试剂的检测波长是吸收波长,这是需要区别的。

Trinder's试剂,显色底物,鲁米诺