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吖啶酯可检测甲醛、乙醛对DNA的损伤！

发布时间：

2021-03-18

环境污染物、电离辐射、药物化疗及细胞代谢等多种外源和内源因素能够引起各种形式的DNA损伤，其中DNA双链断裂对基因组稳定性的危害最严重，可威胁到细胞的生存，建立简单快速灵敏的检测DNA杂交和遗传毒性效应的方法是一项十分有意义的研究课题.下面来简单介绍下DNA损伤检测的方法。

DNA损伤检测有哪几种

DNA损伤检测的方法有凝胶电泳法、紫外分光光度法、荧光法和电化学法、化学发光分析法。化学发光分析法(CL)因其灵敏度高、线性范围宽、操作方便、分析快速、易于实现自动化等优点,已在环境和生命科学等领域得到广泛应用.甲醛和乙醛均为环境污染物,在一定程度上可造成DNA的损伤.研究甲醛和乙醛对DNA损伤前后嵌入DNA中吖啶酯量的变化,引起吖啶酯化学发光强度的变化,研究甲醛和乙醛对DNA的损伤行为,建立一种简单的评价甲醛和乙醛对DNA损伤程度的化学发光分析方法.

吖啶酯检测环境对DNA损伤的方法

1.首先将所用玻璃发光池在一定在一定量的浓硝酸中浸泡数小时,进行酸化处理,二次水冲.在酸化处理的发光池中加入20μL1mg/mL小牛胸腺DNA,放置1h,使DNA吸附在发光池底部,然后再用二次水洗去未吸附上的小牛胸腺DNA,得到吸附有DNA的发光池.

2.在此发光池中加入50μL9.6×10-7g/mL吖啶酯,嵌合反应1h,使AE嵌入DNA双链结构

中,用二次水洗去未嵌合的AE.最后在发光池中按顺序依次加入发光启动试剂,检测嵌合在

DNA中的AE产生的化学发光.检测甲醛和乙醛损伤小牛胸腺DNA时,在AE嵌合后的DNA中加入损伤试剂,一定时间后用二次水洗去DNA受损后释放出的AE,加入发光启动试剂检测嵌合在DNA中的AE产生的化学发光强度.

研究表明,吖啶酯可作为嵌入DNA双螺旋结构良好的化学发光指示剂.此种检测方法对DNA断裂损伤化学发光检测方法是可行的,具有简单、灵敏等优点,为环境污染物对DNA的损伤研究提供了一种简单的研究方法.德晟吖啶酯类发光标记物具有水解稳定性好，热稳定性和信噪比高等性质，且标记条件温和，标记率高，标记后不影响分离，因此被认为是理想的化学标记物。