Trinder反应中酶和显色底物的稳定方法

发布时间:

2021-04-05


在体外诊断领域,酶比色法是目标成分定量或定性测试的一种常用方法,且在国内应用非常普遍,比如Trinder反应中的酶HRP催化显色底物TOOS产生显色反应的检测方法,因有酶的参与,提高酶活显色底物的稳定性非常有价值。

一些反应产物摩尔吸光度高的显色底物,如TOOSTOPS等除了用于湿化学法,还能用于干化学法:将所需反应试剂(TOOS4-AAP)及所需酶(HRP等)固定在膜载体上,滴加样品后生成H2O2继而释放出新生态氧,氧化显色底物,通过反应产物的量来间接地测定目标成分。酶专一性强,催化效率高,但在干化学法中受温度、压力、光照影响稳定性差,湿化学法中酶处于液态或低浓度也易失活。

 

显色底物TOOS粉末

另一方面大多数显色底物,如TOOSMAOSTMB等也容易被缓慢氧化,所以其溶液不能长时间暴露在空气中。提高生物活性酶及显色底物的稳定性方法有很多种:

1.添加酶溶液保护剂,能使多种酶如ALTASTLDHALPCK在水溶液或血清基质中的活性在室温下稳定2周,但对干化学试纸作用不显著。

2.显色底物稳定方法,采用具有碳原子数816的烷基的表面活性剂及类黄酮系色素物质,但配方复杂,试剂难以买到,且保护剂对测试结果有干扰。

3.有一种比显色底物还原性更强的保护剂,但其加入的保护剂含有伯氨基常常引起非特异性反应。

4.采用偶氮染料作为显色底物的稳定剂,稳定作用良好且不造成干扰,但染料有时与显色剂的峰值吸收波长接近,使空白对照偏高。

5.一种聚合物及其组合物保护剂,能提高酶和显色底物的稳定性,适用的显色底物有TOOS4-AATOPSMAOS等,适用HRPCHO等多种酶,适用于葡萄糖、肌酐、尿酸、胆固醇、甘油三脂等指标的检测。

可以看出各种现有关于酶或显色底物的保护剂,有些是有缺陷的,如成本高、检测偏差仅适用于湿化学法等,因此提高酶和显色底物稳定性的方法还需进一步的研究。德晟是生产显色底物及其酶的厂家,建议大家多注意显色底物与酶的使用事项。

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