色原底物TOPS测定游离脂肪酸步骤
发布时间：
2021-04-14
血清中游离脂肪酸（FFA）的测定是一项重要的生化检测指标，FFA与人体健康与否息息相关。由于血清成分复杂且FFA的种类较多，检测受干扰因素多，所以通常采用色原底物TOPS来测定FFA。
色原底物TOPS试剂
色原TOPS测定FFA步骤：
- 在容器中先加入按配方比例已称量好的缓冲液，然后依次加入ATP、辅酶A、4-氨基安替比林、离子激活剂（氯化镁）、稳定剂（BSA）、防腐剂，加入适量水后加入表面活性剂，用浓盐酸调节PH到pH6-9，最后加入酰基辅酶A合成酶，然后搅拌过滤，所得滤液中再加入蒸馏水到定量得试剂A 。
- 在容器中加入缓冲液，然后依次加入色原TOPS、水、表面活性剂，调节PH到pH6-9，最后加入HRP和乙酰CoA氧化酶，然后搅拌过滤，所得滤液中再加入蒸馏水到定量得到试剂B。
- 将上述试剂灌装分至小瓶，在2-8°C保存。取试剂A与样本以一定比例混匀，孵育一定时间，读取吸光值A1；加入试剂B混匀，孵育一定时间，读取吸光值A2。样本中FFA浓度=标准液浓度Χ(ΛΑ_/ΛΑ_#)，ΛΑ_=Α2-A1。
配制缓冲液：
在洁净的玻璃容器中首先加入按配方比例已称量好的HEPES缓冲液(Good’s缓冲液即两性离子缓冲液，包括HEPES、Tris、MES、MOPS等)，加入适量水后加入表面活性剂5ml/L TritonX-100,用浓盐酸调节pH到pH6-9，用量约为5ml/L，然后搅拌过滤，所得滤液中再加入蒸馏水到定量。
以TOPS作为色原底物检测血清或血浆FFA的方法精确度高、测量误差小，而且在众多Trinder’s色原中受乙酰CoA小、稳定性高、摩尔吸光系数大几项标准中最合适的色原。德晟生产的色原底物除了TOPS之外，还有TOOS、MAOS、ADPS等，适合血糖等其它生化指标检测。
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