MOPS缓冲液作为无磷培养基的的配方及注意事项

发布时间:

2021-06-03


在以前的很多文章中,我们介绍过MOPS培养基的一些配置方法,但是并没有讲具体在配置过程中需要注意的事项,今天此文会非常详细的把一些事项列举出来,对于那些还没有配置过MOPS培养基的朋友们,我们准备了一些MOPS培养基的配置方案。希望能给大家一些指引和帮助。

MOPS Minimal Medium

10X MOPS混合物

100毫升

 

0.132M K2HPO4

10毫升

 

 H2O

880毫升

 

1mg / ml硫胺素

0.1毫升

(可选-我们不使用硫胺素,因为它不会影响此培养基中大肠杆菌K-12 MG1655的生长速率。)

全部的

990毫升

 

1.混合上面的成分,并用大约300微升的10M NaOH将pH值调节到7.2。
2.过滤消毒。可以在4度下保存长达1个月。
3.使用前,添加10 ml 100X碳源(适当时-我们通常使用0.1%葡萄糖的最终浓度)。

10X MOPS混合物

1.在带有搅拌棒的1 L烧杯中,将以下物质添加到约300 ml milliQ H2O中:

成分

固件

MOPS

209.3

83.72

Tricine

179.2

7.17

2.添加10 M KOH使其最终pH值为7.4(10至20 ml)
3.使总体积达到440ml。

4.制备新鲜的FeSO4溶液并将其添加到MOPS / Tricine溶液中:

成分

固件

H2O体积(毫升)

库存浓(M)

FeSO4 •7H2O

278

0.028

10

0.01

5.将以下解决方案添加到MOPS / tricine / FeSO4中(请参阅下面的方法,制作每种方法):按所示顺序混合!

成分

体积

1.9M NH 4氯

50毫升

0.276M K2SO4

10毫升

0.02M氯化钙2•2H2O

0.25毫升

2.5 M氯化镁2

2.1毫升

5 M氯化钠

100毫升

微量营养素库存

0.2毫升

高压灭菌milliQ H2O

387毫升

全部的

1000毫升

6.用容量为1L的0.2微米过滤器进行过滤灭菌
7.等分到100或200ml无菌塑料瓶中,并在-20°冷冻。

10倍MOPS混合物中使用的方法

分别制作,将指定的量混合到指定的体积中。存放在室温下。

成分

固件

库存浓(M)

体积(毫升)

笔记

NH4Cl

53.49

1.9

50.82

500

 

钾2SO4

174.3

0.276

4.8

100

 

氯化钙2•2H2O

147

0.02

0.294

100

 

氯化镁2

203.3

2.5

50.75

100

 

氯化钠

58.44

5

292.2

1000

 

微量营养素储备液(100毫升)

将所有内容混合在40ml高压灭菌的milliQ H2O中,使总体积达到50ml。存放在室温下。

成分

分子式

固件

克50毫升

钼酸铵

(NH4)6Mo7O24•4H2O

1235.9

0.009

硼酸

 h3BO3

61.83

0.062

氯化钴

CoCl2

237.9

0.018

硫酸铜

CuSO4

249.7

0.006

氯化锰

MnCl2

197.9

0.040

硫酸锌

ZnSO4

287.5

0.007

磷酸钾K2HPO4溶液:

笔记!!确保使用二元K2HPO4,并且不要使用二元KH2PO4!!!高压灭菌后可在室温下保存。

成分

固件

库存浓(M)

体积(毫升)

笔记

K2HPO4

173.2

0.132

23.0

1000

高压灭菌器

 

MOPS,MOPS培养基