色原底物、化学发光底物及荧光底物

发布时间:

2021-09-08


诊断酶制剂时IVD领域非常重要的一类蛋白制剂,酶的底物有很多,基本可以分为显色底物、发光底物、荧光底物等,比较有代表性的有TOOS、TMB、鲁米诺、荧光素等等。

酶法检测与胶体金的区别

有酶的底物参与的检测都是通过酶促反应进行的,生成的产物有颜色的变化或产生化学发光或荧光,然后用仪器检测这些变化,根据这些变化与待测物含量的关系进行检测分析。这类检测方法与比浊法中的胶体金有明显区别,胶体金是通过胶体金颗粒(负电荷)与蛋白质或其它生物大分子以静电方式结合;而酶法检测是用底物直接标记或者用酶来标记待测的物质,是以化学键的形式结合,更加稳定。

IVD中的色原底物、荧光底物、发光底物

色原底物的特点:

色原底物也就是通常说的显色试剂、显色底物,常用的有Trinder’s试剂中的TOOS、MAOS以及ELISA中的TMB等等。由于显色反应比较好检测,所以这类试剂的应用比较早和普遍。显色底物的常用来检测血糖、血脂、肝肾功能等许多生化检测项目;它也可以与免疫反应相结合,但不用底物直接标记,而是用过氧化物酶来标记抗体或抗原。

荧光底物的特点:

荧光底物是在色原底物之后发展出来的过氧化物酶的底物,检测灵敏度也比色原底物更高,可同时用几种不同颜色的荧光材料,但设备昂贵,检测成本高,也容易受细胞或其它分子产生的自发荧光干扰,观测和保存时对光敏感不稳定。

化学发光底物的特点:

化学发光则与荧光不同,是指在化学反应的过程中所产生的化学能被吸收使分子激发而发射的光,荧光则是吸收了光能使分子激发而发射的光。化学发光不需要像荧光那样的外界光源,检测灵敏度高、背景低, 因而应用更加广泛。比较常用的有鲁米诺、异鲁米诺、AMPPD以及吖啶酯等。

吖啶酯的发光不需要酶的催化,其实不能算底物,不过它比鲁米诺更有优势,而且可以直接进行标记,有着非常好的发展应用趋势。除了荧光底物之外,德晟生产研发的包括多种Trinder’s试剂、鲁米诺、吖啶酯以及酶制剂。

 

显色底物,化学发光底物,TOOS,鲁米诺