生化试剂诊断系统介绍
发布时间：
2019-06-20
临床生化中，通常用手动或自动生化分析仪来测定酶类、糖类、脂类、蛋白和非蛋白氮类等指标，用于血糖、血脂、胆固醇、肝功能、肾功能等基础检查项目，来判断人体是否处于健康状态，并判断是由何种原因引起。
其基本原理都是利用一系列生物化学反应对样品进行检测，最终回归于分光光度法的检测。不同的生化诊断差异主要还是体现在前面不同的检测系统，下面分别说明。
一、NAD+-NADH（NADP+-NADPH）系统。
还原态的NADH（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）和NADPH（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸）在340nm有特征性吸收峰，而变成氧化态后，就没有特征吸收峰了，利用其偶联的脱氢酶(工具酶)反应，根据340nm吸光度的变化，可以测定物质的浓度或活性。
应用此系统的临床项目有：ALT(丙氨酸转氨酶)、AST(谷草转氨酶)、CK（肌酸激酶）、LDH（乳酸脱氢酶）、CK-MB（肌酸磷化脢-同工脢）、α-HBDH（α-羟丁酸脱氢酶） 、 Glu（血糖）、UREA（尿素）、NH4+、CO2等
以ALT(丙氨酸转氨酶)为例，ALT能催化L-丙氨酸生成L谷氨酸和α-丙酮酸的反应，生产的产物在乳酸脱氢酶（LDH）的催化下使NADH变成氧化态，NADH减少从而引起340nm处吸光度下降，下降速率与ALT活性成正比（酶动力学法），因此可以测定ALT的活性。
二、p-NP和p-NA系统
p-NA（对硝基苯酚）或p-NP（磷酸对硝基苯酚）在405nm有特征性吸收峰，根据405nm吸光度的变化，可以测定物质的浓度或活性。
应用此系统的临床项目有：ALP(丙氨酸转氨酶)、ACP（酸性磷酸酶）、r-GT（谷氨酰氨基转移酶）、AMY（淀粉酶）等
以ALP的的检测原理（IFCC）为例，在镁离子和锌离子存在下，碱性磷酸酶会解离对硝基苯酚磷酸盐生产磷酸盐和对硝基苯酚，用ALP催化，对硝基苯酚增加，405nm处吸光度上升，上升速率与ALP的活性成正比，因此测定吸光度可以测定ALP活性。
三、H2O2偶联的指示系统
这个系统用的非常广泛，通常用到的有GOD（葡萄糖氧化酶）和POD（过氧化物酶）以及色原：传统色原苯酚，新型Trinder’s试剂（如ADPS试剂、MAOS、TOOS等），DA46，DA67等。
四、其它显色反应
TP的反应：蛋白质中的肽键（—CONH—）在碱性溶液中能与铜离子生产紫红色络合物，
导致540nm处吸光度增加，增加的程度与蛋白质的含量（肽键含量）成正比。
ALB的反应：在pH4.2的环境中，溴甲酚绿在有非离子去垢剂聚氧乙烯月桂存在时，可以蛋白质形成蓝绿色复合物，导致630处的吸光度增加，增加的程度与蛋白质含量成正比。
生化反应,生化试剂检测,显色底物,生物缓冲剂
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