德晟关于神经氨酸苷酶的纯化方法介绍
发布时间：
2020-12-28
神经氨酸苷酶是乙酰-神经氨酸水解酶（唾液酸酶）的俗称。它的pH稳定性为4.0～9.5，比活性：≥400U/mg，该酶可以催化水解糖蛋白和寡糖的 α2-3、α2-6 和 α2-8键连接的 N-乙酰神经氨酸残基，下面由德晟科技为您介绍神经氨酸苷酶纯化方法，这种纯化方法包括以下操作步骤。
(1) 超滤浓缩：景取产脲节杆崗的发酵液h淸1〜20U进行膜超滤，用缓冲液A对超滤后的浓缩液进行稀释至0..5〜10L ;
(2)硫酸铵沉淀：缓慢加入226〜516g硫酸钱，搅拌20〜4()m1ndW 1〜5h，5000〜15000g离心10〜30m1n，去上清，沉淀用缓冲液B溶解到100〜1000ml，搅拌充分后透析过夜；
(3) DEAE琼脂糖凝胶FF柱层析：1)RAE琼脂糖凝胶FF柱用缓冲液B平衡后，将透析后样品进行h样,缓冲液B平衡，缓冲液C洗脱，收集洗脱样品；
⑷苯基琼脂糖凝胶FF柱层析：往收粜的洗脱样品屮加入（NH 4 ) 2 S0 4 使终浓度达到0. 6〜().8M，然后苯基琼脂糖凝胶FF柱用缓冲液丨)平衡，将加入/ (NH 4 ) 2 S0 4 的洗脱样品进行上样，缓冲液丨)平衡，缓冲液E洗涤，缓冲液F洗脱；
将步骤（4)得到的洗脱样品进行超滤浓缩后用缓冲液B进行换液，然后冻干，以上操作均在0〜5°C条件下进行；以上缓冲液A、B、C、1)、E、F分别是：
缓冲液 A :10 〜100mM Tr1s-HCL, 100 〜500mM NaCL，pH6. 5 〜8. 5 ;
缓冲液 B : 10 〜100mM Tr1 s-HCl，pH6. 5 〜8. 5 ;
缓冲液 C :10 〜100mM Tr1s-HCL，10 〜1000mM NaCl，PH6. 5 〜8. 5;
缓冲液 D :10 〜l00mM Tr1s_HCl，0.7 〜0. 9M(NH4 )2 SO4 , PH6. 5 〜8. 5;
缓冲液 E :10 〜l00mM Tr1s_HCl，0.4 〜0. 6M(NH4 )2 SO4 , PH6. 5 〜8. 5;
缓冲液 F:10〜100mM Tr1s-HCl，0.2 〜0.4M(NH4 )2 SO4 , PH6.5 〜8. 5 ;
以上就是德晟介绍的神经氨酸苷酶的纯化方法,它包括超滤浓缩、硫酸铵沉淀、DEAE琼脂糖凝胶FF柱层析、苯基琼脂糖凝胶FF柱层析、换液冻干等步骤。以上操作均在0〜5°C条件下进行。用该方法纯化得到的神经氨酸苷酶纯度高、底物特异性结合能力高,用该方法得到的神经氨酸苷酶来检测人体血清屮唾液酸含量，精确度更高。
神经氨酸苷酶,德晟
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